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鏈霉素快速檢測試劑盒說明書
點擊次數(shù):840 更新時間:2020-08-11

鏈霉素

快速檢測試劑盒說明書

一、原理

本試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在微孔條上預包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物鏈霉素將和微孔條上預包被的偶聯(lián)抗原競爭抗鏈霉素抗體,加入酶標記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物鏈霉素的含量成負相關,與標準曲線比較即可得出相應殘留物鏈霉素的含量。

二、試劑盒特性

  • 試劑盒靈敏度:   0.1ppb
  • 孵育溫度:       37
  • 孵育時間:       30min30min15min
  • 樣本檢測下限

  ··············································  1 ppb

雞肝、牛奶 ······································  4 ppb

 /蜂王漿 ···································  2 ppb

  • 交叉反應率

鏈霉素  ··········································   100%

慶大霉素  ······································· 0.1%

雙氫鏈霉素  ····································  108%

卡那霉素  ······································· 0.1%

  • 樣本回收率

      ····································  85±22%

雞肉組織  ····································  80±22%

蜂蜜/蜂王漿   ······························  75±22%

三、試劑盒組成

1

微量測試孔

每條8孔,一板12條

2

標準液×6瓶

(1ml/瓶)

0ppb

0.1ppb

0.4ppb

1.6ppb

6.4ppb

25.6ppb

3

酶標記物

12ml

紅色帽

4

抗體工作液

7ml

藍色帽

5

底物A液

7ml

白色帽

6

底物B液

7ml

黑色帽

7

終止液

7ml

黃色帽

8

20X濃縮洗滌液

40ml

白色帽

9

10X濃縮復溶液

50ml

透明帽

四、所用儀器、試劑

具備的儀器:酶標儀、均質器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平(感量0.01g)、恒溫箱、恒溫水浴鍋

微量移液器:單道 20200µl、單道1001000µl、多道 30300 µl

      劑:氫氧化鈉、乙腈、正己烷、三氯yi

五、樣本前處理步驟

  • 樣本處理前須知

a)實驗中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時要更換吸頭。

b)實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈,必要時可對實驗器具進行清潔,以避免污染干擾實驗結果。

  • 樣本前處理需配制:

配液1  0.5%三氯yi酸溶液

0.5g三氯乙suan加去離子水定容100ml。

配液2  3%三氯乙suan溶液

3g三氯乙suan加去離子水定容100ml。

配液3  1M NaOH溶液:

4g NaOH加去離子水定容至100ml。

配液4  0.1M NaOH溶液:

0.4g NaOH加去離子水定容至100ml。

配液5  樣本復溶液:

10X濃縮復溶液用去離子水19稀釋。

  • 樣本處理:

a)牛奶處理方法

  • 取牛奶1ml,按1:39稀釋,混合30s。(50µl牛奶+1950µl樣本復溶液)
  • 50µl用于分析。

樣本稀釋倍數(shù):  40 

b)雞肉處理方法

  • 2±0.05g去除脂肪的勻漿樣本,4ml 3%三氯yi酸,充分混勻2min; 室溫4000r/min以上,離心10min;
  • 取上清液100µl,加入100µl0.1M NaOH,再加入300 µl樣本復溶液,充分混勻;
  • 50µl用于分析。

樣本稀釋倍數(shù):  10 

c)雞肝處理方法

  • 2±0.05g去除脂肪的勻漿樣本,6ml 0.5%三氯yi酸和2ml乙腈,充分混勻5min;
  • 室溫4000r/min以上,離心10min;
  • 2ml上清液加入2ml正己烷,充分混勻靜置3min,取0.5ml下層清亮液體,室溫4000r/min以上,離心5min;
  • 50µl下層清亮液(若有分層,須去除掉上層液體取下層清亮液體),加入450µl樣本復溶液混勻,混合30s
  • 50µl用于分析。

    樣本稀釋倍數(shù):  40

d)蜂蜜、蜂王漿處理方法

  • 稱量1±0.05g 樣本加入2ml 去離子水,振蕩至*溶解;
  • 室溫4000r/min以上離心10 min。
  • 100µl上清液,加入400µl樣本復溶液混勻,混合30s;
  • 50µl用于分析。

樣本稀釋倍數(shù): 10 

六、 酶標免疫分析程序:

  • 測定前應須知:
  • 使用前將需用試劑和板條的溫度回升至室溫(2025)。
  • 使用之后立即將所有試劑放回28
  • ELISA分析中的再現(xiàn)性,很大程度上取決于洗板的一致性,正確的洗板操作是ELISA測定程序中的要點。
  • 所有恒溫孵育過程,避免光線照射,用蓋板膜蓋住微孔板。
  • 操作步驟:
  • 28冷藏環(huán)境中取出所需試劑,室溫(2025)平衡30min以上,注意每種液體試劑使用前均須搖勻。
  • 取出框架及需要數(shù)量的微孔,將不用的微孔放入自封袋,保存于2-8。
  • 配液:將40ml濃縮洗滌液(20倍濃縮)用去離子水按照1:19稀釋(1份濃縮洗滌液+19份去離子水),或按所需用量配制洗滌液。
  • 編號:將樣本和標準品對應微孔按序編號,每個樣本和標準品做2孔平行,并記錄標準孔和樣本孔所在的位置。
  • 加標準品/樣本50µl /孔,然后加入抗體工作液50µl/孔,用蓋板膜封板,37℃環(huán)境中反應30min
  • 倒出孔中液體,將酶標板倒置在吸水紙上拍打,去除孔中液體。加入250µl/孔洗滌液,15-30s后倒出孔中液體,用吸水紙拍干,如此重復操作共洗板5次。
  • 酶標記物:加入酶標記物100µl/孔,用蓋板膜封板,37℃環(huán)境中反應30min。取出酶標板,如前述洗板5次。
  • 顯色:每孔加入底物A50µl,再加底物B50µl,輕輕振蕩混勻,37環(huán)境中避光顯色15min。
  • 測定:加入終止液50µl/孔,輕輕振蕩混勻,設定酶標儀于450nm處(建議用雙波長450/630nm檢測,5min內讀數(shù)),測定每孔OD值。

七、結果判定

結果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含鏈霉素量成負相關。

1、粗略判定:

用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設樣本1的吸光度值為0.3,樣本2的吸光度值為1.0,標準液吸光度值分別是:0ppb2.243 0.1ppb1.816;0.4ppb1.4151.6ppb0.74;6.4ppb0.31325.6ppb0.155。則樣本1的濃度范圍是6.4ppb25.6ppb;樣本2的濃度范圍是0.4ppb1.6ppb,乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中鏈霉素實際濃度。

2、定量分析

1)百分吸光率的計算,標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以第—個標準(0標準)的吸光度值,再乘以100%,即

百分吸光%)=

B

×100%

B0

B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值

B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值

2)標準曲線的繪制與計算

以標準品百分吸光率為縱坐標,以鏈霉素標準品濃ng/ml)的半對數(shù)為橫坐標,繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中,從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度,乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中鏈霉素實際濃度。

若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算,更便于大量樣本的準確、快速分析。

八、 注意事項

  • 室溫低于25或試劑及標本未回到室溫(2025)會導致所有標準的OD值偏低。
  • 在洗板過程中如果出現(xiàn)板孔干燥的情況,則會伴隨著標準曲線不成線性,重復性不好的現(xiàn)象。所以洗板拍干后應立即進行下一步操作。
  • 混合要均勻,否則會出現(xiàn)重復性不好的現(xiàn)象。
  • 反應終止液為2M硫酸,避免接觸皮膚。
  • 不要使用過了有效日期的試劑盒;稀釋或攙雜使用會引起靈敏度、OD值變化;不要交換使用不同批號的盒中試劑。
  • 不用的微孔板放進自封袋重新密封;標準物質和無色的發(fā)色劑對光敏感,因此要避免直接暴露在光線下。
  • 顯色液若有任何顏色表明變質,應當棄之。標準品1的吸光度值小于0.5時,表示試劑可能變質。
  • 該試劑盒jia反應溫度為37,溫度過高或過低將導致檢測吸光度值和靈敏度發(fā)生變化。

九、儲藏條件和保質期

  • 儲藏條件:試劑盒于28保存,不要冷凍。
  •   期:該產品有效期為1年,生產日期見包裝盒。

提示:酶標板真空包裝袋若有漏氣,酶標板仍然正常有效,不影響實驗結果,請放心使用。

 

 

實驗代做服務:

 

免疫組化IHC染色實驗服務

細胞、組織TUNEL凋亡染色實驗服務

試劑盒免費代檢測

實驗室代做實驗項目

 

透射電鏡服務實驗服務

石蠟/冰凍切片TUNEL凋亡

核仁組成區(qū)嗜銀-AGNOR染色實驗服務

免疫共沉淀(CHIRP)實驗

RNA結合蛋白免疫沉淀(RIP)實驗代做

酶聯(lián)免疫(ELISA)技術服務

雞傳染性法氏囊病病毒VP2抗體診斷試劑盒

喹諾酮類快速檢測試劑盒

組織芯片/微陣列定制技術服務

 

染色質免疫沉淀分析(CLIP)實驗服務

 

多因子液相芯片技術(Luminex)實驗

免疫細胞化學ICC實驗服務

ATP/ADP檢測實驗服務

蛋白雙向(2-D)電泳實驗服務

蛋白相互作用分析

堿性磷酸酶染色實驗服務

PKC活性檢測實驗

非標定量實驗

(Label-free)

 

DIGE技術實驗服務

端粒酶活性檢測實驗

細胞生長曲線的測定

掃描電鏡服務

NF-KB p65活性檢測實驗

 

慢病毒包裝實驗服務

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