口腔/咽拭子基因組DNA快速提取試劑盒
Rapid Swab DNA Kit
保存條件:本試劑盒在室溫儲存 12 個月不影響使用效果. 蛋白酶 K 可室溫運輸,建議-20℃長期保存。
產(chǎn)品介紹:
本試劑盒采用特制的進(jìn)口DNA 吸附柱和*的緩沖液系統(tǒng),特別適合于從口腔咽拭子中分離純化基因
組DNA。各種來源樣品裂解消化處理后 DNA 在高離序鹽狀態(tài)下選擇性吸附于離心柱內(nèi)硅基質(zhì)膜(特
別配備了 Carrier RNA 可以從體系中輕松捕獲微量核酸),再通過一系列快速的漂洗-離心的步驟,將鹽、
細(xì)胞代謝物、蛋白等雜質(zhì)去除,后低鹽的洗脫緩沖液將純凈的基因組 DNA 從硅基質(zhì)膜上洗脫。純化后的
DNA 無雜質(zhì)和 PCR 抑制劑,可直接適用于PCR 分析。
注意事項:
1. 結(jié)合液 CB 或者抑制物去除液 IR 低溫時可能出現(xiàn)析出和沉淀,可以在 37℃水浴幾分
鐘幫助重新溶解,恢復(fù)澄清透明后冷卻到室溫即可使用。
2. 避免試劑長時間暴露于空氣中發(fā)生揮發(fā)、氧化、pH 值變化。
3. Carrier RNA
1) Carrier RNA 使用方法:如果起始處理量很少(口腔咽拭子上收集到的細(xì)胞很少),我們推薦使用 Carrier RNA,如果預(yù)期有較大量 DNA 產(chǎn)量,用戶可以根據(jù)需要選擇是否加入 Carrier RNA。使用時每個樣品提取所需結(jié)合液 CB 中加入 1μl Carrier
RNA 儲存溶液, 將結(jié)合液 CB 與 Carrier RNA 溶液充分顛倒混勻即可(結(jié)合液 CB 容易起泡沫,請勿使用渦旋振蕩混勻)。也可根據(jù)樣品數(shù)量,在總共需要的結(jié)合液CB 中加入總共需要的 Carrier RNA 混勻備用。混合液在室溫 24 小時內(nèi)穩(wěn)定。
自備試劑:無水乙醇
操作步驟:
提示:第-*次使用前請先在15ml 漂洗液 WB 中加入 60ml 無水乙醇,充分混勻,加入后請及時在方框
打鉤標(biāo)記已加入乙醇,以免多次加入!
取樣:取一根醫(yī)用消毒棉簽(手不要碰觸脫脂棉部位),伸進(jìn)口腔,緊靠臉頰內(nèi)側(cè)來回刮拭20 次(不
時旋轉(zhuǎn)棉棒),需充分接觸口腔粘膜。
注意事項:避免用手觸及棉簽,采集前可先用清水輕輕漱口。為防止樣本被食物或者飲料污染,取樣前
30 min 內(nèi)應(yīng)該避免進(jìn)食或者飲水。
1. 用剪刀將棉簽部分從其桿上剪下,放入2ml 離心管中,加入400μl 裂解液 ML。
2. 再加入 20μl 的蛋白酶 K (20mg/ml)溶液,立刻渦旋振蕩充分混勻,56℃放置 30 min,期間每 10 min 渦
旋混勻 10 sec。
3. 加入 400μl 結(jié)合液 CB,立刻渦旋振蕩充分混勻,70℃放置 10 min(擠壓去除拭子, 將盡可能多的裂
解液轉(zhuǎn)移至新的離心管中)。
4. 冷卻后加 200μl 無水乙醇,立刻渦旋振蕩充分混勻。簡短離心以除去管蓋內(nèi)壁的液滴,收集所有的液體
到管底。(如果周圍環(huán)境高于 25℃,乙醇需要冰上預(yù)冷后再加入)
5. 將上一步混合物中加入一個吸附柱AC 中(吸附柱放入收集管中),12,000rpm 離心30-60 sec,倒掉收
集管中的廢液。
6. 加入500μl 抑制物去除液IR,12,000rpm 離心 30 sec,棄廢液。
7. 加入500μl 漂洗液WB(請先檢查是否已加入無水乙醇!),12,000rpm 離心30 sec,棄掉廢液。
8. 重復(fù)操作步驟 7。
9. 將吸附柱 AC 放回空收集管中,12,000rpm 離心2min,將吸附柱置于室溫放置數(shù)分鐘,以*晾干吸附
材料中殘余的漂洗液, 以免漂洗液中殘留乙醇抑制下游反應(yīng)。
10. 取出吸附柱AC,放入一個干凈的離心管中,在吸附膜的中間部位加 20-50μl 洗脫緩沖液 EB (洗脫緩
沖液事先在65-70℃水浴中預(yù)熱效果更好), 室溫放置 1 min,12,000rpm 離心 1 min。將得到的溶液重新加入離心吸附柱中,室溫放置1 min,12,000rpm 離心1 min。
洗脫體積越大,洗脫效率越高,如果需要DNA 濃度較高,可以適當(dāng)減少洗脫體積, 但是小體積不應(yīng)少于 20μl,體積過小降低DNA 洗脫效率,減少DNA 產(chǎn)量。(注意:DNA 產(chǎn)物應(yīng)保存在-20℃,以防 DNA 降解)
得到的基因組DNA** 片段的大小與樣品保存時間、操作過程中的剪切力等因素有關(guān)。回收 得到的DNA** 片段可用瓊脂糖凝膠電泳和紫外分光光度計檢測濃度與純度。
DNA 應(yīng)在 OD260 處有顯著吸收峰,OD260 值為 1 相當(dāng)于大約50μg/ml 雙鏈DNA、
40μg/ml 單鏈 DNA。OD260/OD280 比值應(yīng)為 1.7-1.9,如果洗脫時不使用洗脫緩沖液,而使用滅菌水比值會偏低,因為 pH 值和離子存在會影響光吸收值,但并不表示純度低。
本產(chǎn)品僅供科研不用于臨床診斷
實驗代做服務(wù):
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