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豬圓環(huán)病毒2型抗體診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)
點(diǎn)擊次數(shù):687 更新時(shí)間:2022-10-27

豬圓環(huán)病毒2型抗體診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)

說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱:豬圓環(huán)病毒2抗體診斷試劑盒(酶聯(lián)免疫法)

英文名稱:Diagnostic Kit For Antibodies To

Porcine Circovirus Type 2 Antibody Test Kit

PCV Ab,ELISA

【規(guī)格】

96T×2/

【預(yù)期用途】

本試劑盒主要目的是測定豬血清中豬圓環(huán)病毒抗體??捎糜谠u估感染豬的血清學(xué)診斷以及豬圓環(huán)病毒的流行病學(xué)調(diào)查、豬群豬圓環(huán)病毒疫苗免疫狀況分析。但試劑盒所測結(jié)果不能用于作為區(qū)分免疫抗體和感染抗體的指標(biāo),若想確認(rèn)是疫苗還是野毒感染產(chǎn)生的抗體需結(jié)合臨床資料、免疫狀況及其他診斷方法綜合進(jìn)行分析。

【檢驗(yàn)原理】

本試劑盒應(yīng)用固相酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)原理,由包被有高純度的豬圓環(huán)病毒抗原的微孔反應(yīng)板、辣根過氧化物酶標(biāo)記的抗豬IgG及其它試劑配套組成。其反應(yīng)機(jī)理為包被抗原與樣本中的PCV-Ab結(jié)合,再與酶標(biāo)抗豬IgG抗體形成包被抗+PCV-Ab+酶標(biāo)抗豬IgG抗體復(fù)合物,加入顯色劑,通過酶催化反應(yīng)顯色。顯色深淺與PCV-Ab的量成正比,當(dāng)樣本反應(yīng)顯色后,經(jīng)酶標(biāo)儀檢測所得結(jié)果超過設(shè)定的臨界值時(shí)結(jié)果判為陽性,即表明免疫產(chǎn)生了抗體或有自然感染存在。

【主要組成成份】

1

PCV抗原包被板

96T×2

2

酶標(biāo)記物

22ml

色帽

3

樣本稀釋液

50ml

透明

4

PCV-IgG陰性對照血清

1.5ml

綠色帽

5

PCV-IgG性對照血清

1.5ml

紅色帽

6

顯色劑

12ml×2

色帽

7

終止液

12ml

藍(lán)色帽

8

20X濃縮洗滌液

50ml

白色帽

9

蓋板膜

2

 

10

說明書

1

 

【自備器材】

1酶標(biāo)儀,雙波長450/630nm濾光片

2精確的微量移液器(單道1-100ul0.5-10ul、多道30-300ul

3.水浴箱或恒溫箱

4.微量振蕩器

5.洗液吸移裝置

6.一次性頭(10ul,200ul

7.去離子水

【樣本要求】

1本試劑檢測的樣本為豬血清,樣本應(yīng)無菌采集,28貯存應(yīng)不超過一周,長期應(yīng)在-20以下保存。

2避免使用嚴(yán)重溶血、有沉淀物、含懸浮纖維蛋白及污染長菌及含疊氮鈉血清樣本。

3.樣本中含有常規(guī)用量的EDTA、枸櫞酸鈉或肝素鈉等抗凝劑不影響本實(shí)驗(yàn)。

【實(shí)驗(yàn)準(zhǔn)備】

1試劑盒組分回溫平衡:試劑盒組分在實(shí)驗(yàn)前,先取出置室溫30min,可以獲得最佳結(jié)果。

2樣本稀釋:用試劑盒提供的樣本稀釋液將樣本作40稀釋(加入樣本后溶液顏色會(huì)有變化),稀釋的樣本混合均勻能取得較好結(jié)果。

 3配制洗滌液:將試劑盒所提供濃縮洗滌液直接用去離子水稀釋20倍,即可使用。

【檢驗(yàn)方法】

1.加樣:根據(jù)樣本數(shù)量,取所需板條,檢測時(shí),設(shè)陰、陽性對照各2孔,分別加入不用稀釋的陰、陽性對照血清100μl于相應(yīng)孔中。其余為樣本孔,每孔加100μl用樣本稀釋液稀釋好的樣本(可做單孔也可雙孔檢驗(yàn))。

2.溫育:加樣后,蓋上蓋板膜,置37℃溫育30分鐘。

3洗板:甩去孔內(nèi)液體,用洗滌液注滿反應(yīng)板孔,無需靜置,直接甩出,洗滌3次,最后一次洗滌后吸干板內(nèi)液體。

4加酶:每孔加酶標(biāo)記物100μl。

5.溫育:加好酶標(biāo)記物的反應(yīng)板蓋好蓋板膜,置37℃溫育30分鐘。

6洗板:同步驟3

7顯色:每孔加顯色劑100μl,振蕩混勻,37℃避光反應(yīng)10分鐘。

8終止:每孔加終止液50μl,振蕩10秒,充分混勻,終止后即讀數(shù)。

9.讀數(shù):以450nm/ 630nm雙波長檢測,讀取各孔吸光度值(OD值)。

【結(jié)果判定】

在酶標(biāo)儀上測各孔的OD值。檢測結(jié)果有效的條件是陽性對照孔的平均OD≥0.6,陰性對照孔的平均OD值必須<0.1;樣品中抗體存在與否,或樣本中抗體的相對水平的高低由S/P值決定,S/P值計(jì)算時(shí)按以下方式處理:

  S/P=(樣本OD450/630-NCx())/(PCx()-NCx()),其中NCx()表示陰性對照孔平均OD450/630值,PCx()表示陽性對照孔平均OD450/630值;

當(dāng)樣本的S/P≥0. 2時(shí)判為陽性;樣品S/P值<0.2時(shí)判為陰性;

樣本中抗體相對水平——效價(jià)(ET),其與S/P的關(guān)系如下:

lgET的倒數(shù))= 1.0267x + 0.6884

x=S/P值。

此效價(jià)是根據(jù)實(shí)驗(yàn)室目前對PCV檢測方法和免疫的抗體反應(yīng)兩方面綜合而定;在免疫時(shí)效檢測和記錄有代表性樣本的抗體效價(jià)是對豬群的免疫狀況的最好評價(jià),得出的豬群狀況可對免疫全程中抗體滴度的分布和變化進(jìn)行分析。

若進(jìn)行大量樣本檢測時(shí),可使用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行分析數(shù)據(jù)結(jié)果,該軟件可登陸本公司官方網(wǎng)站下載。

 

【檢驗(yàn)結(jié)果的解釋】

1.嚴(yán)重溶血、血清中纖維蛋白分離不充分、含紅血球樣本可能導(dǎo)致假陽性;有血脂樣沉淀或長菌的樣本可能導(dǎo)致假陰性。

2.因個(gè)體差異或免疫時(shí)間長短等因素可能會(huì)出現(xiàn)個(gè)別豬只免疫疫苗后檢測結(jié)果為陰性。

3.陽性結(jié)果用于感染豬的血清學(xué)診斷以及流行病學(xué)調(diào)查時(shí)需結(jié)合其他診斷方法和臨床資料進(jìn)行分析。

【產(chǎn)品性能指標(biāo)】

1.特異性:以本品檢測參比血清,符合率達(dá)*。

2.靈敏度:本試劑盒檢測方法的靈敏度最高可達(dá)15120

3.重復(fù)性:不同批次間CV%)不高于8%。

4.穩(wěn)定性試劑盒在2℃8℃放置6個(gè)月或37℃放置3天,測定結(jié)果達(dá)到以上1-3標(biāo)準(zhǔn)。

【注意事項(xiàng)】

1.本試劑盒僅供研究使用。

2.不要使用過期的試劑盒組分,不要把不用批次的組分混合使用。

3.使用試劑盒之前,一定要仔細(xì)閱讀說明書。

4.本試劑盒應(yīng)按含有傳染性材料對待,試驗(yàn)廢棄物應(yīng)經(jīng)121℃高壓蒸汽滅菌30分鐘,或用5.0g/L次氯酸鈉等消毒劑處理30分鐘后廢棄。

5.微孔板從冷藏環(huán)境中取出時(shí)應(yīng)在室溫中平衡至潮氣干盡后方可拆開,未用完的微孔板須放回有干燥劑的鋁箔袋并密封2℃-8℃保存。未用完的液體試劑應(yīng)蓋好瓶蓋,與其它配套組份放入試劑盒中于2℃-8℃避光保存。

6.若20倍濃縮洗滌液出現(xiàn)結(jié)晶,屬正?,F(xiàn)象,放置37℃至溶解后即可。

7.應(yīng)用微量移液器加入樣本及試劑,并經(jīng)常校對其準(zhǔn)確性。

8.加洗滌液時(shí)應(yīng)做到滿而不溢,防止孔口有游離酶不能洗凈或各孔間的交叉污染。

9.終止液有腐蝕性,若濺到皮膚或衣物上應(yīng)立即用大量清水沖洗干凈。

【儲(chǔ)存條件及有效期】

2℃8℃避光保存,防止冷凍,有效期6個(gè)月。

【生產(chǎn)日期及批號】

詳見包裝袋和外包裝盒。

 

 

 

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