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THP-1 人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞傳代/復(fù)蘇技巧
點(diǎn)擊次數(shù):250 更新時(shí)間:2024-05-17

THP-1 人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞

Human Monocyte Leukemia Cells ,THP1

貨號(hào):YJ-h213(STR鑒定)

價(jià)格: 1800.0

規(guī)格: 1*106 

細(xì)胞介紹

該細(xì)胞對(duì)乳汁珠和激活的紅細(xì)胞有吞噬作用,無(wú)表面和胞質(zhì)免疫球蛋白。可以用佛波醇 TPA誘導(dǎo)單核細(xì)胞分化。

細(xì)胞特性

1 來(lái)源:急性單核細(xì)胞白血病,單核細(xì)胞

2 形態(tài):?jiǎn)魏思?xì)胞,懸浮

3 含量:>1x106 細(xì)胞數(shù)

4 規(guī)格:T25瓶(15ml離心管)或者1mL凍存管包裝

5)  用途:僅供科研使用。

運(yùn)輸和保存

干冰運(yùn)輸及復(fù)蘇好存活細(xì)胞

11mL凍存管包裝干冰運(yùn)輸,收到后-80度冰箱保存過(guò)夜后轉(zhuǎn)入液氮或直接復(fù)蘇,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

2)復(fù)蘇的存活細(xì)胞15mL離心管常溫發(fā)貨,收到后按照細(xì)胞接收后的處理方法操作。

細(xì)胞接收后的處理

1) 收到細(xì)胞后請(qǐng)勿拆除封口膜,75%酒精消毒擦拭瓶壁將15mL離心管置于37℃培養(yǎng)箱放置約1-2h,若發(fā)現(xiàn)離心管破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請(qǐng)拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2)請(qǐng)?jiān)诩?xì)胞移入2個(gè)新的T25培養(yǎng)瓶后,在45X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛移入培養(yǎng)瓶的細(xì)胞拍照(10×20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備

1 準(zhǔn)備RPMI-1640(推薦YJ-0002)培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;0.05 mM β-巰基乙醇(細(xì)胞培養(yǎng)級(jí) 推薦:YJ-8211);雙抗,1%。

2 參考傳代比例:傳代時(shí)控制細(xì)胞密度在2-4 ×105cell / mL,并在細(xì)胞生長(zhǎng)至8-10 ×105cell / mL時(shí)進(jìn)行傳代。

3 參考換液頻率:傳代時(shí)換液

4 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

5 凍存液:完全培養(yǎng)液95%,DMSO 5%(使用該凍存液后,按照我?guī)斓慕?jīng)驗(yàn)復(fù)蘇存活率約50%,復(fù)蘇后需要額外培養(yǎng)7-10天才能恢復(fù)生長(zhǎng))

6 【注意事項(xiàng)】:

該細(xì)胞為懸浮細(xì)胞,根據(jù)培養(yǎng)經(jīng)驗(yàn)以及客戶(hù)的反饋,傳代時(shí)使用【半換液法】對(duì)細(xì)胞狀態(tài)較為有利,因此我?guī)旖ㄗh您使用【半換液法】進(jìn)行傳代。

1. 您在收到我們提供的用15mL離心管(充液為完全培養(yǎng)基)發(fā)貨的細(xì)胞后,請(qǐng)不要通過(guò)離心的方式收集細(xì)胞,可以先準(zhǔn)備兩個(gè)新的T25培養(yǎng)瓶,然后將細(xì)胞混合均勻后移入兩個(gè)新的T25培養(yǎng)瓶中,補(bǔ)加培養(yǎng)基到10ml。放入到37℃培養(yǎng)箱中。

2. thp-1懸浮細(xì)胞。該細(xì)胞在培養(yǎng)時(shí)更喜歡溫和處理,培養(yǎng)時(shí)盡量少對(duì)細(xì)胞進(jìn)行離心處理以此造成對(duì)細(xì)胞的傷害。換液時(shí)不要全培養(yǎng)基更換,建議您使用【半換液法】進(jìn)行傳代,添加細(xì)胞培養(yǎng)基以稀釋細(xì)胞至維持密度即可。

3.  細(xì)胞對(duì)血清質(zhì)量較為敏感,我?guī)旖ㄗh您使用進(jìn)口大品牌優(yōu)質(zhì)血清進(jìn)行培養(yǎng)。FBS不要滅活,如果細(xì)胞生長(zhǎng)緩慢請(qǐng)嘗試使用其他FBS或暫時(shí)將FBS濃度增加到20%

4.  該細(xì)胞的培養(yǎng)液中需添加β-巰基乙醇(細(xì)胞培養(yǎng)級(jí)別),若不添加,可能會(huì)對(duì)細(xì)胞狀態(tài)造成影響。

β-巰基乙醇的穩(wěn)定性有限,不可將β-巰基乙醇添加到完全培養(yǎng)基中長(zhǎng)期儲(chǔ)存,在每次傳代或液體添加時(shí)再添加β-巰基乙醇。

β-巰基乙醇(2-巰基乙醇)被添加到淋巴細(xì)胞或其他細(xì)胞培養(yǎng)物中,因?yàn)樵谂囵B(yǎng)基中使用的FBS中氨基酸半胱氨酸供不應(yīng)求,而胱氨酸則很多。有些細(xì)胞(例如T細(xì)胞)無(wú)法將半胱氨酸轉(zhuǎn)運(yùn)到細(xì)胞質(zhì)中,必須將其轉(zhuǎn)化為半胱氨酸。β-巰基乙醇將胱氨酸還原為可被細(xì)胞轉(zhuǎn)運(yùn)的形式,然后轉(zhuǎn)化為細(xì)胞生長(zhǎng)所需的半胱氨酸。  β-巰基乙醇還是一種還原劑,可以分解培養(yǎng)中細(xì)胞產(chǎn)生的許多有毒代謝產(chǎn)物,從而改善細(xì)胞周?chē)沫h(huán)境。

5.  該細(xì)胞對(duì)細(xì)胞密度較為敏感,培養(yǎng)、傳代時(shí)請(qǐng)注意保持細(xì)胞密度在合適的范圍(具體請(qǐng)參考細(xì)胞說(shuō)明書(shū))。

6 . 該細(xì)胞凍存后復(fù)蘇率較低,凍存時(shí)請(qǐng)酌情提高細(xì)胞量。

7 .通常情況下可以通過(guò)向正在生長(zhǎng)的細(xì)胞中添加完全培養(yǎng)基來(lái)維持細(xì)胞的生長(zhǎng),每7天可以將細(xì)胞離心并重懸于新配的培養(yǎng)基中,來(lái)完成細(xì)胞的全換液。

(頻繁的細(xì)胞計(jì)數(shù)是監(jiān)測(cè)thp-1的最佳方法。這些細(xì)胞應(yīng)該每23天通過(guò)向燒瓶中簡(jiǎn)單加入少量新鮮培養(yǎng)基(使它們具有條件培養(yǎng)基)來(lái)培養(yǎng)。您不需要每次都離心細(xì)胞并重新傳代。當(dāng)在我們的實(shí)驗(yàn)室中培養(yǎng)時(shí),到第2天,細(xì)胞通??梢詳U(kuò)增到具有更多培養(yǎng)基的更大的燒瓶中。當(dāng)細(xì)胞密度達(dá)到8×10 5個(gè)活細(xì)胞/ ml時(shí)需要進(jìn)行傳代。不允許細(xì)胞密度超過(guò)1×106)活細(xì)胞/ ml。)

二. 細(xì)胞處理:

1 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過(guò)夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

2 細(xì)胞換液: 通常情況下可以通過(guò)向正在生長(zhǎng)的細(xì)胞中添加完全培養(yǎng)基來(lái)維持細(xì)胞的生長(zhǎng),每7天可以將細(xì)胞離心并重懸于新配的培養(yǎng)基中,來(lái)完成細(xì)胞的全換液。

3 細(xì)胞傳代:傳代時(shí)控制細(xì)胞密度在2-4 ×105cell / mL,并在細(xì)胞生長(zhǎng)至8-10 ×105cell / mL時(shí)進(jìn)行傳代。

4) 細(xì)胞凍存:待細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)良好時(shí),可進(jìn)行細(xì)胞凍存。    

1,細(xì)胞凍存時(shí),取上清,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。

2,4min 1000rpm 離心去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞,根據(jù)細(xì)胞數(shù)量加入凍存液,輕輕混勻,DMSO終濃度為5%,細(xì)胞密度2x106/支,每支凍存管凍存1ml細(xì)胞懸液,注意凍存管做好標(biāo)識(shí)。

THP-1 人單核細(xì)胞白血病細(xì)胞.png


注意事項(xiàng)

1.收到細(xì)胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細(xì)胞有污染,請(qǐng)立即與我們聯(lián)系。

2.收到細(xì)胞先不開(kāi)瓶蓋,瓶身擦拭酒精后放在培養(yǎng)箱靜置2-4小時(shí)(視細(xì)胞密度而定)穩(wěn)定細(xì)胞狀態(tài)。接著在倒置顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況,并對(duì)細(xì)胞進(jìn)行不同倍數(shù)拍照(建議收細(xì)胞時(shí)就整體外觀拍一張照片,觀察培養(yǎng)基的顏色和是否有漏液情況,隨后在顯微鏡下拍下細(xì)胞狀態(tài),100*,200*各一張),觀察記錄細(xì)胞在運(yùn)輸過(guò)程中是否有污染情況。作為我方進(jìn)行銷(xiāo)售依據(jù)。

3.由于細(xì)胞狀態(tài)受環(huán)境、操作和運(yùn)輸?shù)榷喾矫嬉蛩赜绊?,故本公司只保證客戶(hù)收到細(xì)胞后一周內(nèi)的細(xì)胞狀態(tài),故客戶(hù)需要售后時(shí)需出示收到細(xì)胞的時(shí)間證明及客戶(hù)提供收貨時(shí)間和發(fā)現(xiàn)問(wèn)題后客服人員溝通的時(shí)間證明,期間間隔時(shí)間不能大于7天。

4.所有動(dòng)物細(xì)胞均視為有潛在的生物危害性,必須在二級(jí)生物安全臺(tái)內(nèi)操作,并請(qǐng)注意防護(hù),所有廢液及接觸過(guò)此細(xì)胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

 

2011年開(kāi)始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)及論文潤(rùn)色服務(wù),協(xié)助客戶(hù)各類(lèi)實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤(rùn)色十多年,是您值得信賴(lài)的科研合作伙伴!

如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無(wú)法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

 

實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù):

 


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