日本黄色三级免费网址,色呦呦在线观看91精品,三级久久黄色播放视频,亚洲国产欧美日韩精品推荐

當前位置:
首頁 > 資料下載 > 牛傳染性胸膜肺炎檢測試劑盒(實時熒光PCR法)說明書
目錄導(dǎo)航 Directory
服務(wù)熱線
資料下載Down

牛傳染性胸膜肺炎檢測試劑盒(實時熒光PCR法)說明書

提 供 商: 上海研謹生物科技有限公司 資料大?。?/td>
圖片類型: 下載次數(shù): 164 次
資料類型: PDF 瀏覽次數(shù): 1428次
相關(guān)產(chǎn)品:
文件下載    
詳細介紹

牛傳染性胸膜肺炎檢測試劑盒(實時熒光PCR法)說明書

【產(chǎn)品名稱】

通用名稱:牛傳染性胸膜肺炎檢測試劑盒(實時熒光PCR法)

英文名稱:Contagious Bovine Pleuropneumonia (CBPP)Detecting Kit (Real-Time PCR Method)

【包裝規(guī)格】 25T/盒 & 50T/盒

【預(yù)期用途】

本試劑盒利用改良分子信標實時熒光PCR原理,主要用于牛傳染性胸膜肺炎的定性篩查檢測。

【檢驗原理】

本試劑盒針對牛傳染性胸膜肺炎基因設(shè)計特異性引物和探針,在反應(yīng)體系中含有牛傳染性胸膜肺炎 DNA模板的情況下,PCR反應(yīng)得以進行并釋放熒光信號。利用儀器對PCR過程中相應(yīng)通道的信號強度進行實時監(jiān)測和輸出,實現(xiàn)檢測結(jié)果的定性分析。

【主要組成成份】

序號

組成

25T/盒

50T/盒

1

牛傳染性胸膜肺炎  PCR反應(yīng)液

 437.5μL×1管

875μL×1管

2

牛傳染性胸膜肺炎 混合酶液

  62.5μL×1管

125μL×1管

3

牛傳染性胸膜肺炎 陽性對照

   40μL×1管

 40 μL×1管

4

牛傳染性胸膜肺炎 陰性對照

   40μL×1管

 40 μL×1管

5

DNA提取液

1.5 mL×1管

1.5 mL×2管

6

說明書

1份

1份

注:陰性對照為不含牛傳染性胸膜肺炎核酸的其它菌的混合物,陽性對照為牛傳染性胸膜肺炎經(jīng)滅活處理的核酸提取物。

【儲存條件及有效期】避光-20以下保存,避免反復(fù)凍融,有效期12個月。

【適用儀器】ABI 系列、Bio-Rad系列、Agilent Stratagene MX系列 、Roche LightCycler R480、Cepheid SmartCycler、Rotor-Gene系列、等多通道實時熒光定量PCR儀。

【樣本要求】

1. 動物組織樣本采集后取10mg~100mg用滅菌生理鹽500μL~1000μL水研磨,離心后取上懸液備用,避免標本間交叉污染。

2. 標本收集后若不能立即檢測,可置于2~8℃冷藏過夜保存;如需長期保存,標本應(yīng)凍存于-20℃~-80℃,長期保存不會影響本試劑盒檢測結(jié)果,但有可能影響培養(yǎng)法檢測結(jié)果的準確性。

3. 標本保存期間應(yīng)避免反復(fù)凍融。

【檢驗方法】

1. 試劑準備(試劑準備區(qū))

(1)從冰箱中取出試劑盒, 從試劑盒中取出實驗所需試劑,充分融化混勻并瞬時離心以去除管壁附著液體。

(2)核算當次實驗所需要的反應(yīng)數(shù)(n),并根據(jù)如下表所示反應(yīng)體系計算當次實驗所需要的各種試劑量。

n =陰性對照數(shù)(1T)+陽性對照數(shù)(1T)+誤差預(yù)留量(1T)+樣本數(shù)

單反液配制表(每份)

PCR反應(yīng)液

17.5 μL

混合酶液(Taq酶+UNG酶)

 2.5 μL

(3)在無菌離心管中加入上述試劑,充分混勻后瞬時離心。按照20 μL/管分裝量將試劑分裝至PCR反應(yīng)管。

(4) 蓋緊PCR反應(yīng)管蓋后將PCR反應(yīng)管和試劑盒中的DNA提取液轉(zhuǎn)移至樣本處理區(qū)。 剩余試劑放回-20以下冰箱冷凍保存。

2.樣本準備(樣本處理區(qū))

公司病毒核酸提取試劑盒提取DNA,具體操作按照其試劑盒說明書操作。或按以下方法操作:

a.取試劑準備區(qū)傳遞過來的DNA提取液,2000 rpm 離心10 s后備用。

b.取樣本自然沉降后的上清液1 mL,加入到1.5 mL無菌離心管中,12000 rpm離心5 min后,吸干上清,保留沉淀。

c.每管沉淀中加入DNA提取液50 μL,將沉淀懸浮后100℃加熱處理5 min。

d.12000 rpm離心2 min,取上清用于PCR檢測。

3.加樣

在上述制備好的PCR反應(yīng)樣本管中分別加入處理好的待測標本DNA各5μl、終體積25μl/管,蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時低速離心,轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。陰性對照和陽性對照管則各加5μL試劑盒自帶的陰性對照或陽性對照品,終體積為25μl/管,蓋好PCR反應(yīng)蓋混勻后瞬時低速離心,轉(zhuǎn)移到PCR儀器上。

 

4.PCR(PCR擴增區(qū))

(1)取樣本處理區(qū)準備好的PCR反應(yīng)管,放置在實時熒光定量PCR儀樣品槽相應(yīng)位置,并記錄放置順序。

(2)按下表設(shè)置儀器核酸擴增相關(guān)參數(shù)進行PCR擴增。

 

反應(yīng)體積

25 μL

通道選擇

FAM通道采集牛傳染性胸膜肺炎

熒光信號

PCR

反應(yīng)

條件

步驟

條件

循環(huán)數(shù)

UNG處理

50:2分鐘(min)

1

預(yù)變性

95:3分鐘(min)

1

預(yù)擴增

95:5秒(s)

5

55:40秒(s)

PCR擴增

95:5秒(s)

40

55:40秒(s)

(此階段結(jié)束時采集熒光信號)

注:ABI系列熒光PCR儀在設(shè)置時不選ROX校正,設(shè)置淬滅基團選擇None。

【陽性判斷值或者參考區(qū)間】

1.試劑盒有效性判定:

(1)陽性對照:有典型S型擴增曲線或Ct值≤35。

(2)陰性對照:Ct值>38或無Ct值,線形為直線或輕微斜線,無指數(shù)增長期。

2.標本結(jié)果判定:

(1)陽性:標本檢測結(jié)果Ct值≤35或有明顯指數(shù)增長期。

(2)可疑:標本檢測結(jié)果Ct值在35~38范圍內(nèi)。此時應(yīng)對標本進行重復(fù)檢測,如重復(fù)實驗結(jié)果Ct值仍在35~38范圍內(nèi),有明顯指數(shù)增長期,則判定為陽性,否則為陰性。

(3)陰性:標本檢測結(jié)果Ct值>38或無Ct值。

【檢驗結(jié)果的解釋】

通道及檢測結(jié)果

標本檢測結(jié)果解釋

FAM

陰性(-)

標本中未檢出牛傳染性胸膜肺炎

陽性(+)

標本中檢測出牛傳染性胸膜肺炎

【檢驗方法的局限性】

  • 當檢測樣本中被檢核酸濃度含量低于本試劑盒的低檢出*可能會發(fā)生假陰性的結(jié)果。
  • 本試劑盒僅供標本初步篩查使用,對于本試劑盒檢測陽性結(jié)果應(yīng)進一步使用培養(yǎng)法進行確診。

【產(chǎn)品性能指標】 產(chǎn)品的低檢出限為102CFU,產(chǎn)品CV值≤5%。

【注意事項】

  • 整個檢測過程應(yīng)嚴格按照本說明書要求分別在試劑準備區(qū)、樣本處理區(qū)和PCR擴增區(qū)進行操作,各區(qū)實驗服、儀器、耗材應(yīng)獨立使用,不能混用;實驗用吸頭采用帶濾芯吸頭;樣本處理區(qū)應(yīng)配有生物安全柜,樣本處理在生物安全柜中進行操作;三個區(qū)應(yīng)該配有紫外線殺菌裝置。
  • 每次實驗應(yīng)該設(shè)置陰、陽性對照。
  • 為保證試劑不受標本污染,必須將DNA提取液、混合酶液及PCR反應(yīng)液保存于試劑準備區(qū)。
  • 試劑盒所有試劑在使用前應(yīng)該在常溫下充分融化混勻,并應(yīng)瞬時離心。
  • 試劑盒內(nèi)所配陰性和陽性對照在di一次使用前應(yīng)全部轉(zhuǎn)移至標本準備區(qū),并單獨存放。
  • 為防止熒光干擾,應(yīng)避免裸手直接接觸PCR反應(yīng)管,并應(yīng)避免在PCR反應(yīng)管上進行任何標記。
  • 儀器擴增相關(guān)參數(shù)應(yīng)按照本說明書相關(guān)要求進行設(shè)置;不同批號試劑不能混用。
  • ABI系列熒光定量PCR儀參數(shù)設(shè)置中不選ROX校正,淬滅基因選擇None。
  • 實驗過程中產(chǎn)品的廢棄物應(yīng)該進行無害化處理后方可丟棄。
  • 喹諾酮類快速檢測試劑盒

滬公網(wǎng)安備 31011802001676號

欧美日韩永久精品一区二区| 欧美亚洲综合中文字幕蜜桃成熟| 精品视频一区二区三区美女视频| 亚洲Av无码精品色午夜蜜芽| 国产亚洲欧美另类网爆在线| 亚洲欧美中文在线另类| 国产精品一区二区久久| 国产精品久久久久久妇女| 国产精品不卡a∨在线观看| 国产h视频在线播放| 日韩在线|中文字幕| 精品日韩欧美一区在线播放| 国产综合精品久久久久成人蜜臀| 欧美日韩一区二区在线不卡| 国产精品日本欧美一区二区三区| 国产盗摄视频在线播放| 亚洲av成为人一区二区| 日韩精品久久理论片| 日本视频高清一区二区| 欧洲在线观看亚洲三区| 欧美精品在线观看不卡| 久久国产亚洲一区二区三区| 久草视频在线视频在线视频在线观看| 国产精品久久久久久福利69| 亚洲国产精品91网| 一区二区久久久久久久久| 欧美性猛烈粗大精品| 亚洲欧美另类久久久精品| 亚洲高清日韩中文字幕| 日韩免费码中文字幕在线| 国语自产拍无码精品视频在线| 一区二区三区精品亚洲视频| 亚洲国产午夜精品不卡| 学生妹在线观看无码| 激情文学五月婷444| 国产精品欧美大片在线观看| 亚洲gv永久无码天堂网| 1024欧美一区二区三区人妻| 国产好大对白露脸高潮| 久久免费少妇高潮视频| 有码无码人妻一区二区|