日本黄色三级免费网址,色呦呦在线观看91精品,三级久久黄色播放视频,亚洲国产欧美日韩精品推荐

當(dāng)前位置:
首頁(yè) > 技術(shù)文章 > 人細(xì)胞凋亡酶聯(lián)免疫檢測(cè)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
目錄導(dǎo)航 Directory
服務(wù)熱線
技術(shù)支持Article
人細(xì)胞凋亡酶聯(lián)免疫檢測(cè)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書(shū)
點(diǎn)擊次數(shù):1088 更新時(shí)間:2017-01-09

細(xì)胞凋亡酶聯(lián)免疫檢測(cè)(ELISA)

試劑盒使用說(shuō)明書(shū)

  • 僅用于科研,不得用于臨床診斷!
  • 用于定量檢測(cè)人血清、血漿及其他相關(guān)液體樣本中細(xì)胞凋亡的含量。
  • 有效期:6個(gè)月。
  • 保存條件:2-8

使用前請(qǐng)仔細(xì)閱讀說(shuō)明書(shū)!

 

實(shí)驗(yàn)原理:

本試劑盒應(yīng)用生物素雙抗體夾心法測(cè)定樣品中人細(xì)胞凋亡水平。向預(yù)先包被了人細(xì)胞凋亡單克隆抗體的酶標(biāo)孔中加入細(xì)胞凋亡,溫育;溫育后,加入生物素標(biāo)記的抗細(xì)胞凋亡抗體。再與鏈霉親和素-HRP結(jié)合,形成免疫復(fù)合物,再經(jīng)過(guò)溫育和洗滌,去除未結(jié)合的酶,然后加入底物TMB顯色。TMB在HRP酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成zui終的黃色。顏色的深淺和樣品中的細(xì)胞凋亡呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在450nm波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度(OD值),通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中細(xì)胞凋亡的濃度。

 

試劑盒組成

試劑盒組成:

48孔配置

96孔配置

說(shuō)明書(shū)

1份

1份

封板膜

2片(48)

2片(96)

密封袋

1個(gè)

1個(gè)

酶標(biāo)包被板

1×48

1×96

標(biāo)準(zhǔn)品:32ng/ml

0.5ml×1瓶

0.5ml×1瓶

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

鏈霉親和素-HRP

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

生物素標(biāo)記的抗Apoptosis抗體

0.5ml×1瓶

1 ml×1瓶

顯色劑A液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

顯色劑B液

3 ml×1瓶

6 ml×1瓶

終止液

3ml×1瓶

6ml×1瓶

濃縮洗滌液

(20ml×20倍)×1瓶

(20ml×30倍)×1瓶

 

注意事項(xiàng):

  • 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡15-30分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開(kāi)封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
  • 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
  • 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在5分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
  • 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高(樣本OD值大于標(biāo)準(zhǔn)品孔*孔的OD值),請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)(n倍)后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)zui后乘以總稀釋倍數(shù)(×n)。
  • 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
  • 底物請(qǐng)避光保存。
  • 嚴(yán)格按照說(shuō)明書(shū)的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn).
  • 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
  • 本試劑不同批號(hào)組分不得混用。

 

需要而未提供的試劑和器材:

  • 37℃恒溫箱。
  • 標(biāo)準(zhǔn)規(guī)格酶標(biāo)儀。
  • 精密移液器及一次性吸頭
  • 蒸餾水,
  • 一次性試管
  • 吸水紙

 

樣本處理及要求

1. 血清:室溫血液自然凝固10-20分鐘,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如出現(xiàn)沉淀,應(yīng)再次離心。

2. 血漿:應(yīng)根據(jù)標(biāo)本的要求選擇EDTA或檸檬酸鈉作為抗凝劑,混合10-20分鐘后,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)該再次離心。

3. 尿液:用無(wú)菌管收集,離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清,保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。胸腹水、腦脊液參照實(shí)行。

4. 細(xì)胞培養(yǎng)上清:檢測(cè)分泌性的成份時(shí),用無(wú)菌管收集。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)的成份時(shí),用PBS(PH7.2-7.4)稀釋細(xì)胞懸液,細(xì)胞濃度達(dá)到100萬(wàn)/ml左右。通過(guò)反復(fù)凍融,以使細(xì)胞破壞并放出細(xì)胞內(nèi)成份。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。保存過(guò)程中如有沉淀形成,應(yīng)再次離心。

5. 組織標(biāo)本:切割標(biāo)本后,稱(chēng)取重量。加入一定量的PBS,PH7.4。用液氮迅速冷凍保存?zhèn)溆?。?biāo)本融化后仍然保持2-8℃的溫度。加入一定量的PBS(PH7.4),用手工或勻漿器將標(biāo)本勻漿充分。離心20分鐘左右(2000-3000轉(zhuǎn)/分)。仔細(xì)收集上清。分裝后一份待檢測(cè),其余冷凍備用。

6. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行提取,提取按相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行,提取后應(yīng)盡快進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。若不能馬上進(jìn)行試驗(yàn),可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融.

7. 不能檢測(cè)含NaN3的樣品,因NaN3抑制辣根過(guò)氧化物酶的(HRP)活性。。

 

操作程序

  • 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋?zhuān)?本試劑盒提供原倍標(biāo)準(zhǔn)品一支,用戶可按照下列圖表在小試管中進(jìn)行稀釋。)

16ng/ml

5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的原倍標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

8 ng/ml

4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的5號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

4 ng/ml

3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的4號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

2ng/ml

2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的3號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

1 ng/ml

1號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品

150μl的2號(hào)標(biāo)準(zhǔn)品加入150μl標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

  • 根據(jù)代測(cè)樣品數(shù)量加上標(biāo)準(zhǔn)品的數(shù)量決定所需的板條數(shù)。每個(gè)標(biāo)準(zhǔn)品和空白孔建議做復(fù)孔。每個(gè)樣品根據(jù)自己的數(shù)量來(lái)定,能使用復(fù)孔的盡量做復(fù)孔。
  • 將稀釋好的標(biāo)準(zhǔn)品按照濃度由高到低或者由低到高依次加入酶標(biāo)包被板孔中。
  • 分別設(shè)空白孔(空白對(duì)照孔不加樣品、生物素標(biāo)記的抗Apoptosis抗體鏈霉親和素-HRP,其余各步操作相同)及待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板上待測(cè)樣品孔中先加樣品40μl,然后再加生物素標(biāo)記的抗Apoptosis抗體10μl。加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,盡量不觸及孔壁,輕輕晃動(dòng)混勻。
  • 溫育:用封板膜封板后置37℃溫育30分鐘。
  • 配液:將30(48T的20倍)倍濃縮洗滌液用蒸餾水30(48T的20倍)倍稀釋后備用。
  • 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。
  • 加酶:每孔加入鏈霉親和素-HRP 50μl,空白孔除外。
  • 溫育:操作同5。
  • 洗滌:操作同7。
  • 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 
  • 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色)。
  • 測(cè)定:以空白孔調(diào)零,450nm波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度(OD值)。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后10分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

 

實(shí)驗(yàn)操作流程圖:

 

計(jì)    算:

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),OD值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的OD值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與OD值計(jì)算出標(biāo)      準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的OD值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋      

倍數(shù),即為樣品的實(shí)際濃度。                                

滬公網(wǎng)安備 31011802001676號(hào)

中文字幕日本一区二区在线观看| 91国产精品免费观看| 蜜臀91精品国产高清在线| 尤物亚洲综合色区另类aⅴ| av高清在线免费播放| 日韩无打码一区二区三区| 欧美日韩在线免费视频| 亚洲1区2区3区av| 色婷婷亚洲蜜桃久久| 国内精品久久久久久久久久久| 久久久久蜜桃成人精品一区| 欧美精品亚洲精品日| 亚洲国产精品无码久久久高潮| 91精品一区二区三区蜜臀| 成人毛片女人18免费片| 91精品一区二区三区蜜臀| 99久久精品视香蕉蕉| 国产人成尤物在线免费观看| 一区二区三区欧美激情| 夫妇交换性4中文字幕无码| 日本成人在线不卡视频| 欧美亚洲一区二区成人| 国产精品亚洲一区二区三区欲| 国产线精品视频在线观看| 国产精品国语对白在线观看| 亚洲Av无码精品色午夜蜜芽| 国产精品日韩在线亚洲一区| 国产精品亚洲А∨天堂网不卡| 国产精品日韩在线亚洲一区| 国产爽的冒白浆的视频| 一本大道av伊人久久综合| 激情小说校园春色亚洲| 东北女人国语对白视频| 久久久精品熟女亚洲av麻豆| 丰满少妇高潮一区二区| 亚洲国产精品久久久久av| 五月婷婷六月丁香综合小说| 一区二区三区欧美日本| 亚洲国产成人精品女人久久0| 中文字幕熟女一区二区三区| 日韩专区精品无码资源首页|