萊克多巴胺
快速檢測試劑盒說明書
一、原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在微孔條上預包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物萊克多巴胺將和微孔條上預包被的偶聯(lián)抗原競爭抗萊克多巴胺抗體,加入酶標記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留物萊克多巴胺的含量成負相關,與標準曲線比較即可得出相應殘留物萊克多巴胺的含量。
二、試劑盒特性
組 織 ······································· 0.2ppb
尿 樣 ······································· 0.1ppb
萊克多巴胺(Ractopamine) ···················· 100%
多巴酚丁胺(dobutamine) ····················· < 1%
沙丁胺醇(Salbutamol ) ························ <0.1%
克倫特羅(Clenbuterol)························· <0.1%
組織、尿樣 ···························· 60%~120%
三、試劑盒組成
1 | 微量測試孔 | 每條8孔,一板12條 | |
2 | 標準液×6瓶 (1ml/瓶) | 0ppb | 0.05ppb |
0.15ppb | 0.45ppb | ||
1.35ppb | 4.05ppb | ||
3 | 酶標記物 | 7ml | 紅色帽 |
4 | 抗體工作液 | 7ml | 藍色帽 |
5 | 底物A液 | 7ml | 白色帽 |
6 | 底物B液 | 7ml | 黑色帽 |
7 | 終止液 | 7ml | 黃色帽 |
8 | 20X濃縮洗滌液 | 15ml | 白色帽 |
9 | 2X濃縮提取液 | 50ml X 2 | 透明帽 |
四、所用儀器、試劑
具備的儀器:酶標儀、均質(zhì)器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平(感量0.01g)、恒溫箱、打印機
微量移液器:單道 20~200µl、單道100~1000µl、多道30~300 µl
試 劑:氫氧化鈉、濃鹽酸
五、樣本前處理步驟
(a)實驗中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時要更換吸頭。
(b)實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈,必要時可對實驗器具進行清潔,以避免污染干擾實驗結(jié)果。
配液1 0.2M 鹽酸
取 17.2ml 濃鹽酸加去離子水定容至 1L。
配液2 1M 氫氧化鈉
稱取4g 氫氧化鈉固體加去離子水定溶至
100ml。
配液3 樣本提取液
2X濃縮提取液用去離子水1:1稀釋。
(a)組織樣本的處理方法
樣本稀釋倍數(shù): 4倍
注:此方法可與克倫特羅,沙丁胺醇處理方法通用。
(b)尿樣樣本的處理方法
取50µl清亮尿樣直接測定(如果尿樣渾濁一定要過濾或4000r/min離心10min,直至得到清亮尿樣),暫不使用的樣本應冷凍保存。
樣本稀釋倍數(shù): 1倍
六、 酶標免疫分析程序:
將15ml濃縮洗滌液(20倍濃縮)用去離子水
按照1:19稀釋(1份濃縮洗滌液+19份去離子
水),或按所需用量配制洗滌液。
七、結(jié)果判定
結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含萊克多巴胺量成負相關。
1、粗略判定:
用樣本的平均吸光度值與標準值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設樣本1的吸光度值為0.3,樣本2的吸光度值為1.0,標準液吸光度值分別是:0ppb為2.243; 0.05ppb為1.816;0.15ppb為1.415;0.45ppb為0.74;1.35ppb為0.313;4.05ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是1.35ppb~4.05ppb;樣本2的濃度范圍是0.15ppb~0.45ppb,乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中萊克多巴胺實際濃度。
2、定量分析
(1)百分吸光率的計算,標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以個標準(0標準)的吸光度值,再乘以100%,即
百分吸光率(%)= | B | ×100% |
B0 |
B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值
(2)標準曲線的繪制與計算
以標準品百分吸光率為縱坐標,以萊克多巴胺標準品濃度(ng/ml)的半對數(shù)為橫坐標,繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中,從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度,乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中萊克多巴胺實際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算,更便于大量樣本的準確、快速分析。(歡迎咨詢索?。?/span>
八、 注意事項
九、儲藏條件和保質(zhì)期
提示:酶標板真空包裝袋若有漏氣,酶標板仍然正常有效,不影響實驗結(jié)果,請放心使用。