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大鼠微量蛋白(mALB)ELISA試劑盒使用說(shuō)明書
點(diǎn)擊次數(shù):845 更新時(shí)間:2019-04-30

大鼠微量蛋白(mALB)酶聯(lián)免疫分析(ELISA)

 

試劑盒使用說(shuō)明書

 

本試劑盒僅供研究使用。

 

藥品名稱:

通用名:大鼠微量蛋白(mALB)酶聯(lián)免疫診斷試劑盒

使用目的

本試劑盒用于測(cè)大鼠血清、血漿、或其它相關(guān)組織液中微量蛋白(mALB)含量。

實(shí)驗(yàn)原理

本試劑盒應(yīng)用雙抗體夾心法測(cè)定標(biāo)本中大鼠微量蛋白(mALB)水平。用純化的大鼠微量蛋白(mALB)抗體包被微孔板,制成固相抗體,往包被單抗的微孔中依次加入微量蛋白(mALB),再與 HRP 標(biāo)記的抗體結(jié)合,形成抗體-抗原-酶標(biāo)抗體復(fù)合物,經(jīng)過(guò)*洗滌后加底物TMB 顯色。TMB HRP 酶的催化下轉(zhuǎn)化成藍(lán)色,并在酸的作用下轉(zhuǎn)化成終的黃色。顏色的深淺和樣品中的微量蛋白(mALB)呈正相關(guān)。用酶標(biāo)儀在 450nm 波長(zhǎng)下測(cè)定吸光度

OD ,通過(guò)標(biāo)準(zhǔn)曲線計(jì)算樣品中大鼠微量蛋白(mALB)濃度。

試劑盒組成

1

20 倍濃縮洗滌液

30ml×1

7

終止液

6ml×1

2

酶標(biāo)試劑

6ml×1

8

標(biāo)準(zhǔn)品(270μg/L

0.5ml×1

3

酶標(biāo)包被板

12 孔×8

9

標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液

1.5ml×1

4

樣品稀釋液

6ml×1

10

說(shuō)明書

1

5

顯色劑A

6ml×1

11

封板膜

2

6

顯色劑B

6ml×1/

12

密封袋

1 個(gè)

標(biāo)本要求

  1. 標(biāo)本采集后盡早進(jìn)行實(shí)驗(yàn)。
  2. 不能檢測(cè)含NaN3 的樣品,因 NaN3 抑制辣根過(guò)氧化物酶的HRP活性。
  3. 可將標(biāo)本放于-20℃保存,但應(yīng)避免反復(fù)凍融。

操作步驟

  1. 標(biāo)準(zhǔn)品的稀釋與加樣:在酶標(biāo)包被板上設(shè)標(biāo)準(zhǔn)品孔 10 孔,在、第二孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品 100μl,然后在、第二孔中加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,混勻;然后從孔、第二孔中各取 100μl 分別加到第三孔和第四孔,再在第三、第四孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl, 混勻;然后在第三孔和第四孔中先各取 50μl 棄掉,再各取 50μl 分別加到第五、第六孔中,再在第五、第六孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50ul,混勻;混勻后從第五、第六孔中各50μl 分別加到第七、第八孔中,再在第七、第八孔中分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,混勻后從第七、第八孔中分別取 50μl 加到第九、第十孔中,再在第九第十孔分別加標(biāo)準(zhǔn)品稀釋液 50μl,混勻后從第九第十孔中各取 50μl 棄掉。稀釋后各孔加樣量都為 50μl濃度分別為 180μg/L,120μg/L  ,60μg/L,30μg/L15μg/L。
  2. 加樣:分別設(shè)空白孔空白對(duì)照孔不加樣品及酶標(biāo)試劑,其余各步操作相同、待測(cè)樣品孔。在酶標(biāo)包被板待測(cè)樣品孔中先加樣品稀釋液 40μl,然后再加待測(cè)樣品 10μl品稀釋度為 5 。加樣時(shí)將樣品加于酶標(biāo)板孔底部,輕輕晃動(dòng)混勻。
  3. 溫育:用封板膜封板后置 37℃溫育 30 分鐘。


 

  1. 配液:將 20 倍濃縮洗滌液用蒸餾水 20 倍稀釋后備用
  2. 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置 30 秒后棄去,如此重復(fù) 5 次,拍干。
  3. 加酶:每孔加入酶標(biāo)試劑 50μl,空白孔除外。
  4. 溫育:操作同 3。
  5. 洗滌:操作同 5。
  6. 顯色:每孔先加入顯色劑 A50μl,再加入顯色劑 B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15 分鐘.
  7. 終止:每孔加終止液 50μl,終止反應(yīng)此時(shí)藍(lán)色立轉(zhuǎn)黃色。
  8. 測(cè)定:以空白空調(diào)零,450nm 波長(zhǎng)依序測(cè)量各孔的吸光度OD 。 測(cè)定應(yīng)在加終止液后 15 分鐘以內(nèi)進(jìn)行。

 

計(jì)算

以標(biāo)準(zhǔn)物的濃度為橫坐標(biāo),其 OD 值為縱坐標(biāo),在坐標(biāo)紙上繪出標(biāo)準(zhǔn)曲線,根據(jù)樣品的

OD 值由標(biāo)準(zhǔn)曲線查出相應(yīng)的濃度;再乘以稀釋倍數(shù);或用標(biāo)準(zhǔn)物的濃度與 OD 值計(jì)算出標(biāo)準(zhǔn)曲線的直線回歸方程式,將樣品的 OD 值代入方程式,計(jì)算出樣品濃度,再乘以稀釋倍數(shù), 即為樣品的實(shí)際濃度。

注意事項(xiàng)

  1. 試劑盒從冷藏環(huán)境中取出應(yīng)在室溫平衡 15-30 分鐘后方可使用,酶標(biāo)包被板開封后如未用完,板條應(yīng)裝入密封袋中保存。
  2. 濃洗滌液可能會(huì)有結(jié)晶析出,稀釋時(shí)可在水浴中加溫助溶,洗滌時(shí)不影響結(jié)果。
  3. 各步加樣均應(yīng)使用加樣器,并經(jīng)常校對(duì)其準(zhǔn)確性,以避免試驗(yàn)誤差。一次加樣時(shí)間控制在 5 分鐘內(nèi),如標(biāo)本數(shù)量多,推薦使用排槍加樣。
  4. 請(qǐng)每次測(cè)定的同時(shí)做標(biāo)準(zhǔn)曲線,建議做復(fù)孔。如標(biāo)本中待測(cè)物質(zhì)含量過(guò)高樣本 OD 大于標(biāo)準(zhǔn)品孔孔的 OD ,請(qǐng)先用樣品稀釋液稀釋一定倍數(shù)n 后再測(cè)定,計(jì)算時(shí)請(qǐng)后乘以總稀釋倍數(shù)×n×5
  5. 封板膜只限一次性使用,以避免交叉污染。
  6. 嚴(yán)格按照說(shuō)明書的操作進(jìn)行,試驗(yàn)結(jié)果判定必須以酶標(biāo)儀讀數(shù)為準(zhǔn)
  7. 底物請(qǐng)避光保存。
  8. 所有樣品,洗滌液和各種廢棄物都應(yīng)按傳染物處理。
  9. 本試劑不同批號(hào)組分不得混用。
  10. 如與英文說(shuō)明書有異,以英文說(shuō)明書為準(zhǔn)。

檢測(cè)范圍:

10μg/L

規(guī)格:

96 人份/

保存條件及有效期

  1. 試劑盒保存:;2-8℃。
  2. 有效期:6 個(gè)月

滬公網(wǎng)安備 31011802001676號(hào)

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