伊紅染色液(水溶,5%)
伊紅(Eosin)又稱曙紅,屬人工合成染料中的呫噸類染料,為桃紅色或粉紅色的粉末。 分子式為 C20H6O5Br4Na2,分子量為 691.86。伊紅適宜于蘇木精配合染色以顯示正?;虿±?/span>組織的形態(tài)結(jié)構(gòu)。水溶性伊紅 Y 含有一個(gè)醌型苯環(huán)的發(fā)色團(tuán)和兩個(gè)形成鈉鹽的酸性助色團(tuán)(R-COONa、R-ONa)。這種形成鹽類的酸性染料在水中溶解時(shí)解離為帶負(fù)電荷的色酸部分(R-COO 、R-O ),即染料的有色部分和帶正電荷的鈉離子部分(Na+)。染色時(shí)伊紅 Y 帶負(fù)電荷的色- 酸部分-不組織內(nèi)帶正電荷的物質(zhì)以離子鍵的形式結(jié)合而顯色。
伊紅染色液(Eosin Y Stain)采用 *防腐劑,操作簡(jiǎn)單,不使用汞、甲醇等有毒試劑,可以用于組織切片或培養(yǎng)細(xì)胞的染色??梢院兔庖?/span>熒光染色或免疫組化染 色配合使用。一方面可以在伊紅染色后進(jìn)行免疫熒光染色或其它染料的染色,另一方面也可以在免疫組化染色后再進(jìn)行伊紅復(fù)染。本染色液可以重復(fù)使用,直至認(rèn)為效果不佳時(shí)再換用新的染色液,染色后細(xì)胞漿呈粉紅色或紅色。
Eosin Y Stain(5%) 100ml 500ml RT 避 光
1、蒸餾水
2、4%多聚甲醛
3、系列乙醇
操作步驟(僅供參考):
根據(jù)實(shí)驗(yàn)具體要求操作,如果用于普通染色應(yīng)稀釋后,參考如下步驟:
1、樣品處理
a) 對(duì)于石蠟切片:
二甲苯中脫蠟 5~10min。
換用新鮮的二甲苯,再脫蠟 5~10min。無(wú)水乙醇 5min。
90%乙醇 2min。
70%乙醇 2min。蒸餾水 2min。
b) 對(duì)于冰凍切片:
蒸餾水 2min。
用 4%多聚甲醛固定 10min 以上。蒸餾水洗滌 2 分鐘。
換用新鮮的蒸餾水,再洗滌 2min。
2、伊紅染色:對(duì)于上述處理好的樣品,伊紅染色液染色 0.5~2min(根據(jù)染色結(jié)果和要求調(diào)整時(shí)間)。如果需要直接觀察,可以用 70%乙醇洗滌 2 次。如需脫水、透明后封片按后續(xù)步驟進(jìn)行,70%乙醇洗滌后仍可按照后續(xù)步驟進(jìn)行脫水、透明和封片處理。
注:如果用于免疫組化等染色后的復(fù)染,參考上述步驟在其它染色完成后進(jìn)行伊紅染色。
3、脫水、透明、封片或進(jìn)行其它染色a)脫水、透明、封片:95%乙醇脫水 2min。換用新鮮的 95%乙醇再脫水 2min。二甲苯透明 5min。換用新鮮的二甲苯,再透明 5min。用中性樹(shù)膠或其它封片劑封片。顯微鏡下觀察,細(xì)胞漿呈粉紅色或紅色。
b)進(jìn)行其它染色:
如果進(jìn)行免疫熒光染色,或進(jìn)行 Hoechst 等熒光染料的染色,在伊紅染色液染色后:
70%乙醇洗滌 2 次,每次 2min。
PBS 或生理鹽水或 TBS 或 TBST 等用于免疫染色或熒光染料染色的溶液浸泡 5min。
進(jìn)行免疫熒光染色或其它熒光染料的染色。
1、如果需要脫水、透明和封片處理,需自備二甲苯,中性樹(shù)膠或其它封片劑。如果樣品是 石蠟切片,需自備 90%乙醇,無(wú)水乙醇以及二甲苯。
2、為了您的安全和健康,請(qǐng)穿實(shí)驗(yàn)服并戴一次性手套操作。
有效期: 12 個(gè)月有效。
AP-MX-EP說(shuō)明書(無(wú)內(nèi)毒素質(zhì)粒大量試劑盒)
Tris-硼酸電泳緩沖液(5×TBE)