血鈣濃度檢測試劑盒說明書
微量法
注意:正式測定之前選擇2-3個(gè)預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測定。
測定意義:
血鈣幾乎全部存在于血漿中,所以血鈣主要指血漿鈣。血漿鈣有離子鈣和結(jié)合鈣兩種形式,
其中只有離子鈣直接起生理作用,它與結(jié)合鈣處于動(dòng)態(tài)平衡,并受血液 pH 的影響。血鈣水
平與多種重要的生理功能相關(guān),過高或過低都會(huì)影響正常生理功能。本試劑盒用于檢測血液
中游離鈣濃度。
測定原理:
在強(qiáng)堿溶液中游離鈣與 GBHA 反應(yīng)生成紅色鈣-GBHA 復(fù)合物,在 520nm 有吸收峰;通過測定 520nm 吸光度,計(jì)算游離鈣濃度。
自備儀器和用品:
可調(diào)式移液槍、可見分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、石英比色皿/96 孔板、無水甲醇、丙酮和蒸餾水。
試劑組成和配置:
試劑一:液體×1 瓶,4℃保存。
試劑二:液體×1 瓶,4℃保存。
試劑三:液體×1 瓶(空瓶,試劑自備)。取10 mL試劑瓶。依次加入9 mL無水甲醇和1mL丙酮,蓋緊混勻即可。
標(biāo)準(zhǔn)液:液體×1 瓶,3μmol/mL,4℃保存。
血鈣濃度測定操作:
1. 分光光度計(jì)預(yù)熱30min以上,調(diào)節(jié)波長到520nm,蒸餾水調(diào)零。
2. 空白管:取石英比色皿/96孔板,依次加入蒸餾水12μL,試劑一50μL,混勻;再加入試劑二50μL,混勻;zui后加入試劑三100μL,混勻;靜置5min后于520nm測定吸光度A空白管。做一個(gè)空白管即可。
3. 標(biāo)準(zhǔn)管:取石英比色皿/96孔板,依次加入標(biāo)準(zhǔn)液12μL,試劑一50μL,混勻;再加入試劑二50μL,混勻;zui后加入試劑三100μL,混勻;靜置5min后于520nm測定吸光度A標(biāo)準(zhǔn)管。做一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)管即可。
4. 測定管:取石英比色皿/96孔板,依次加入血液樣品12μL,試劑一50μL,混勻;再加入試劑二50μL,混勻;zui后加入試劑三100μL,混勻;靜置5min后于520nm測定吸光度A測定管。記為 A 測定管。
注意:空白管和標(biāo)準(zhǔn)管只需測定一次,做三次重復(fù)。
血鈣濃度計(jì)算公式:
血鈣含量(μmol/mL)= [C 標(biāo)準(zhǔn)液×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)]×V 樣品總=3×(A 測定管-A 空白管)÷(A 標(biāo)準(zhǔn)管-A 空白管)
C 標(biāo)準(zhǔn)液:3μmol/mL; V 樣總:樣品總體積,1 dL=100 mL。
注意事項(xiàng):
1. 宜早晨空腹采血,并且采血后應(yīng)該盡快完成測定。
2. 靜置 5 分鐘后立即測定。
3. 加試劑三后,應(yīng)該在 30 min 內(nèi)完成該管的測定。
4. zui低檢出限為0.1μmol/mL。