呋喃唑酮代謝物
快速檢測試劑盒說明書
一、原理
本試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在微孔條上預包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物呋喃唑酮代謝物將和微孔條上預包被的偶聯(lián)抗原競爭抗呋喃唑酮代謝物抗體,加入酶標記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光度值與其所含殘留物呋喃唑酮代謝物的含量成負相關,與標準曲線比較即可得出相應殘留物呋喃唑酮代謝物的含量。
二、試劑盒特性
肌肉組織 ································· 0.05ppb
雞蛋 ······································· 0.05ppb
蜂蜜 ········································· 0.05ppb
呋喃唑酮代謝物 ································· 100%
呋喃它酮代謝物 ······························· <0.1%
呋喃妥因代謝物 ······························· <0.1%
呋喃西林代謝物 ······························· <0.1%
肌肉組織 ································· 95%±25%
雞蛋 ······································ 95%±25%
蜂蜜 ······································· 85%±23%
三、試劑盒組成
1 | 微量測試孔 | 每條8孔,一板12條 | |
2 | 標準液×6瓶 (1ml/瓶) | 0ppb | 0.01ppb |
0.03ppb | 0.09ppb | ||
0.27ppb | 0.81ppb | ||
3 | 酶標記物 | 7ml | 紅色帽 |
4 | 抗體工作液 | 7ml | 藍色帽 |
5 | 底物A液 | 7ml | 白色帽 |
6 | 底物B液 | 7ml | 黑色帽 |
7 | 終止液 | 7ml | 黃色帽 |
8 | 20X濃縮洗滌液 | 40ml | 白色帽 |
9 | 2X濃縮復溶液 | 50ml | 透明帽 |
10 | 衍生化試劑 | 10ml | 白色帽 |
四、所用儀器、試劑
具備的儀器:酶標儀、均質器、振蕩器、離心機、刻度移液管、天平(感量0.01g)、氮吹儀、恒溫箱、恒溫水浴鍋
微量移液器:單道 20~200µl、單道100~1000µl、多道 30~300 µl
試 劑:氫氧化鈉、K2HPO4·3H2O、正己烷、乙酸乙酯、濃HCl
五、樣本前處理步驟
(a)實驗中必須使用一次性吸頭,吸取不同試劑時要更換吸頭。
(b)實驗之前須檢查各種實驗器具是否干凈,必要時可對實驗器具進行清潔,以避免污染干擾實驗結果。
配液1 0.1M K2HPO4溶液:
稱11.4g K2HPO4·3H2O加去離子水溶解定溶至500ml。
配液2 1M HCl 溶液:
取8.6ml濃HCl加去離子水定容至100ml。
配液3 1M NaOH溶液:
稱4g NaOH加去離子水定容至100ml
配液4 樣本復溶液:
將2X濃縮復溶液用去離子水按1:1稀釋。
(a)肌肉、雞蛋樣本處理方法
稱取1±0.05g的均質物,分別加入4ml的蒸餾水,0.5ml 1M HCl溶液和100µl衍生化試劑,充分振蕩2min;
在37℃過夜孵育(大約16h)或56℃水浴中孵育(2h);
分別加入5ml 0.1M K2HPO4溶液,0.4ml 1M NaOH溶液和6ml乙酸乙酯,充分振蕩30s;
在室溫下(20-25℃)4000r/min以上離心10min(如出現(xiàn)乳化現(xiàn)象或乙酸乙酯層不足 3ml ,在 80 ℃ 水浴孵育樣品10min 并重復離心;或提高轉速和延長離心時間重復離心);
取出3ml的乙酸乙酯到另一個容器中于50℃氮氣/空氣吹干。
用2ml正己烷溶解干燥物,再加入1ml樣本復溶液充分混合30s;在室溫下4000r/min以上離心10min;去除上層正己烷相(如出現(xiàn)乳化現(xiàn)象,則去除上層正己烷后于70℃水浴10-20min,重復離心);
取50µl下層用于分析。
樣本稀釋倍數(shù): 2倍
(b)蜂蜜樣本處理方法
稱取2±0.05g的均質物(蜂蜜),分別加入4ml的蒸餾水,0.5ml 1M HCl溶液和100µl衍生化試劑,充分振蕩2min;
在37℃過夜孵育(大約16h)或56℃水浴中孵育(2h);
分別加入5ml 0.1M K2HPO4溶液,0.4ml 1M NaOH溶液和6ml乙酸乙酯,充分振蕩30s;
在室溫下(20-25℃)4000r/min以上離心10min(如出現(xiàn)乳化現(xiàn)象或乙酸乙酯層不足 3ml ,在 80 ℃ 水浴孵育樣品10min 并重復離心;或提高轉速和延長離心時間重復離心);
取出3ml的乙酸乙酯到另一個容器中于50℃氮氣/空氣吹干;
用2ml正己烷溶解干燥物,再加入1ml樣本復溶液充分混合30s;在室溫下4000r/min以上離心10min;去除上層正己烷相(如出現(xiàn)乳化現(xiàn)象,則去除上層正己烷后于70℃水浴10-20min,重復離心);
取50µl下層用于分析。
樣本稀釋倍數(shù): 1倍
六、 酶標免疫分析程序:
七、結果判定
結果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含呋喃唑酮代謝物量成負相關。
1、粗略判定:
用樣本的平均吸光度值與標準液吸光度值比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設樣本1的吸光度值為0.3,樣本2的吸光度值為1.0,標準液吸光度值分別是:0ppb為2.243; 0.01ppb為1.816;0.03ppb為1.415;0.09ppb為0.74;0.27ppb為0.313;0.81ppb為0.155。則樣本1的濃度范圍是0.27ppb~0.81ppb;樣本2的濃度范圍是0.03ppb~0.09ppb,乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中呋喃唑酮代謝物實際濃度。
2、定量分析
(1)百分吸光率的計算,標準品或樣本的百分吸光率等于標準品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以di一個標準(0標準)的吸光度值,再乘以100%,即
百分吸光率(%)= | B | ×100% |
B0 |
B—標準溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/ml標準溶液的平均吸光度值
(2)標準曲線的繪制與計算
以標準品百分吸光率為縱坐標,以呋喃唑酮代謝物標準品濃度(ng/ml)的半對數(shù)為橫坐標,繪制標準曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標準曲線中,從標準曲線上讀出樣本所對應的濃度,乘以其對應的稀釋倍數(shù)即為樣本中呋喃唑酮代謝物實際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進行計算,更便于大量樣本的準確、快速分析。(歡迎來索取)
八、 注意事項
九、儲藏條件和保質期
提示:酶標板真空包裝袋若有漏氣,酶標板仍然正常有效,不影響實驗結果,請放心使用。