林可霉素
快速檢測試劑盒說明書
一、原理
試劑盒采用間接競爭ELISA方法,在微孔條上預(yù)包被偶聯(lián)抗原,樣本中的殘留物林可霉素藥物和微孔條上預(yù)包被的偶聯(lián)抗原競爭抗林可霉素藥物抗體,加入酶標(biāo)記物后,用TMB底物顯色,樣本吸光值與其所含殘留林可霉素藥物的含量成負(fù)相關(guān),與標(biāo)準(zhǔn)曲線比較即可得出相應(yīng)殘留物林可霉素藥物的含量。
二、試劑盒特性
組 織 ······································ 0.4ppb
飼 料 ······································· 1ppb
蜂 蜜 ······································ 2ppb
林可霉素 ···································· 100%
組 織 ······································ 100±25%
飼 料 ······································· 95±25%
蜂 蜜 ······································ 100±25%
三、試劑盒組成
1 | 微量測試孔 | 每條8孔,一板12條 | |
2 | 標(biāo)準(zhǔn)液×6瓶 (1ml/瓶) | 0ppb | 0.1ppb |
0.3ppb | 0.9ppb | ||
2.7ppb | 8.1ppb | ||
3 | 酶標(biāo)記物 | 7ml | 紅色帽 |
4 | 抗體工作液 | 7ml | 藍(lán)色帽 |
5 | 底物A液 | 7ml | 白色帽 |
6 | 底物B液 | 7ml | 黑色帽 |
7 | 終止液 | 7ml | 黃色帽 |
8 | 20X濃縮洗滌液 | 40ml | 白色帽 |
9 | 20X濃縮提取液 | 50ml | 透明帽 |
四、所用儀器、試劑
具備的儀器:微孔酶標(biāo)儀、打印機(jī)、均質(zhì)器 、振蕩器、離心機(jī)、刻度移液管、天平(感量0.01g)
微量移液器:單道 20~200ul、單道100~1000ul、多道 250ul
五、樣本前處理步驟
處理任何樣本時,都必須注意:
配液1 樣本提取液:
將去離子水與20X濃縮提取液按19:1稀釋。
(a)組織樣本(雞肉/肝、豬肉/肝、蝦、魚等)
1、稱2.0±0.05g 均質(zhì)的組織樣本于50ml離心管中;
2、加入6ml樣本提取液,振蕩2min,4000r/min以上,15℃離心10min;
3、取上層50µl液體用于分析。
樣本稀釋倍數(shù):4
(b)飼料樣本
1、稱1.0±0.05g 粉碎的飼料樣本于50ml離心管中;
2、加入5ml樣本提取液,振蕩1min,4000r/min以上,15℃離心10min;
3、取上層200µl液體加入200µl樣本提取液,震蕩混勻,取50µl用于分析。
樣本稀釋倍數(shù):10
(c)蜂蜜樣本
1、稱1.0±0.05g 的蜂蜜樣本于50ml離心管中;
2、加入5ml樣本提取液,振蕩1min,4000r/min以上,15℃離心10min;
3、取上層200µl液體加入600µl樣本提取液,震蕩混勻,取50µl用于分析。
樣本稀釋倍數(shù):20
六、 酶標(biāo)免疫分析程序:
七、結(jié)果判定
結(jié)果判定有兩種方法,粗略判定可用第1種方法,定量判定用第2種方法。注意樣本吸光度值與其所含林可霉素藥物量成負(fù)相關(guān)。
1、粗略判定:
用樣本的平均吸光度值與標(biāo)準(zhǔn)品比較即可得出其濃度范圍(ng/ml)。假設(shè)樣本1的吸光度值為0.238, 樣本2的吸光度值為0.946,標(biāo)準(zhǔn)液吸光度值分別是:0ppb為1.845; 0.1ppb為1.542;0.3ppb為1.130; 0.9ppb為0.635;2.7ppb為0.326; 8.1ppb為0.156。則樣本1的濃度范圍是2.7ppb - 8.1ppb;樣本2的濃度范圍是0.3ppb - 0.9ppb。乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中林可霉素藥物的實際濃度。
2、定量分析
(1)百分吸光率的計算,標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的百分吸光率等于標(biāo)準(zhǔn)品或樣本的吸光度值的平均值(雙孔)除以第--個標(biāo)準(zhǔn)(0標(biāo)準(zhǔn))的吸光度值,再乘以100%,即
百分吸光率(%)= | B | ×100% |
B0 |
B—標(biāo)準(zhǔn)溶液或樣本溶液的平均吸光度值
B0—0ng/L標(biāo)準(zhǔn)溶液的平均吸光度值
(2)標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制與計算
以標(biāo)準(zhǔn)品百分吸光率為縱坐標(biāo),以林可霉素標(biāo)準(zhǔn)品濃度(ng/ml)的半對數(shù)為橫坐標(biāo),繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線圖。將樣本的百分吸光率代入標(biāo)準(zhǔn)曲線中,從標(biāo)準(zhǔn)曲線上讀出樣本所對應(yīng)的濃度,乘以其對應(yīng)的稀釋倍數(shù)即為樣本中林可霉素藥物實際濃度。
若利用試劑盒專業(yè)分析軟件進(jìn)行計算,更便于大量樣本的準(zhǔn)確、快速分析。
八、 注意事項
九、儲藏條件和保質(zhì)期
提示:酶標(biāo)板真空包裝袋若有漏氣,酶標(biāo)板仍然正常有效,不影響實驗結(jié)果,請放心使用。
實驗代做服務(wù):
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