血液基因組柱式中量提取試劑盒(1-5 ml)說(shuō)明書(shū)
BloodGen Midi Kit
目錄號(hào):K0541
運(yùn)輸條件:室溫(15-25℃)。
保存條件:Buffer RBL 4℃,其他組分室溫(15-25℃)保存。
組分說(shuō)明
Cat. No. K0541
Size 50
Buffer RBL 3×250 ml
Buffer GR 25 ml
Buffer GL 25 ml
Buffer GW1(concentrate) 13 ml
Buffer GW2(concentrate) 15 ml
Buffer GE 15 ml
Proteinase K 50 mg
Proteinase K Storage Buffer 5 ml
Spin Column DL 50
Collection Tube 50
本產(chǎn)品僅供科研使用,請(qǐng)勿用于臨床診斷及其他用途
產(chǎn)品簡(jiǎn)介
本試劑盒適用于從新鮮或冷凍全血(用檸檬酸鹽、EDTA或肝素等抗凝劑處理過(guò)的
血液樣品)、血漿、血清、血沉棕黃層、骨髓、無(wú)細(xì)胞體液等樣本中提取總DNA,包
括基因組DNA,線粒體DNA及病毒DNA。本品可以處理1-5 ml的全血,可純化獲得大小
為100 bp到50 kb的DNA,純化的DNA產(chǎn)量高、質(zhì)量好,最大限度去除蛋白、色素、脂
類及其他抑制性雜質(zhì)污染,可直接用于 PCR、熒光定量PCR、酶切和Southern Blot等
實(shí)驗(yàn)。
產(chǎn)品特點(diǎn)
·柱式提取方法,適用于處理1-5 ml的血液基因組提取。
自備試劑:無(wú)水乙醇。
實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備及重要注意事項(xiàng)
1.向Proteinase K中加入5 ml Proteinase K Storage Buffer使其溶解,-20℃保存。配
制好的Proteinase K勿長(zhǎng)時(shí)間室溫放置,避免反復(fù)凍融,以免影響其活性。
2.樣品應(yīng)避免反復(fù)凍融,否則會(huì)導(dǎo)致提取的DNA的片段較小且提取量下降。
3.本試劑盒最多可以提取1-5 ml全血樣品,如需提取大量血液樣本請(qǐng)選用血液基因組大
量提取試劑盒(#K0544)。
4.第--次使用前應(yīng)按試劑瓶標(biāo)簽說(shuō)明先在Buffer GW1和Buffer GW2中加入無(wú)水乙醇。
5.使用前請(qǐng)檢查Buffer GL是否出現(xiàn)結(jié)晶或者沉淀,如有結(jié)晶或者沉淀,請(qǐng)置于56℃水
浴重新溶解。
6.如下游實(shí)驗(yàn)對(duì)RNA污染較敏感,可加入4 μl DNase Free的RNase A(100 mg/ml),
RNase A本試劑盒并未提供,如需要可單獨(dú)向本公司訂購(gòu),貨號(hào):K0601。
7.試劑盒中的Buffer RBL渾濁后不能繼續(xù)使用。
操作步驟
1.向離心管(自備)中加入1-5 ml血液樣品,加入3倍體積的Buffer RBL輕輕渦旋或顛
倒混勻。
2.3000 rpm離心10分鐘,小心吸棄上清。
3.向沉淀中加入400 μl Buffer GR,重懸沉淀。
注意:如果下游試驗(yàn)對(duì)RNA敏感,可加入4 μl RNaseA(100mg/ml)溶液,震蕩15秒,室溫放置5分鐘。
4.1-2ml血液樣本提取時(shí),向以上溶液中加入40 μl Proteinase K,混勻;2-5ml血液樣
本提取時(shí),向以上溶液中加入100 μl Proteinase K,混勻。
5.加入400 μl Buffer GL,顛倒混勻15次,劇烈渦旋震蕩至少1分鐘。
注意:不要直接將Proteinase K直接加入到Buffer GL。
6.70℃孵育10分鐘,其間顛倒混勻數(shù)次。
注意:1)如溶液未*清亮,補(bǔ)加適量Proteinase K,孵育。延長(zhǎng)孵育時(shí)間至溶液*清亮為止。
2)孵育10分鐘DNA的產(chǎn)量已經(jīng)達(dá)到最大,繼續(xù)延長(zhǎng)孵育時(shí)間對(duì)DNA產(chǎn)量和純度沒(méi)有影響。
7.加入400 μl無(wú)水乙醇,顛倒混勻10次。短暫離心,使管壁和管蓋上液體集中到管底。
8.將上步所得到的溶液全部加入到已裝入收集管( Collection Tube)的吸附柱(Spin
Column DL)中,若一次不能加完溶液,可分多次轉(zhuǎn)入。10,000 rpm(~8,000 x g)
離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。
9.向吸附柱中加入500 μl Buffer GW1(使用前檢查是否加入無(wú)水乙醇),10,000 rpm
離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。
注意:如果提取樣品是小鼠或猴子等血紅素難以除去的種屬的血液基因組,建議重復(fù)步驟9。
10.向吸附柱中加入500 μl Buffer GW2(使用前檢查是否加入無(wú)水乙醇),10,000 rpm
離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。
注意:如需進(jìn)一步提高DNA純度,可重復(fù)步驟10。
11.10,000 rpm離心2分鐘,倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置于室溫?cái)?shù)分鐘,以*晾干。
注意:這一步的目的是將吸附柱中殘余的乙醇去除,乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶促反應(yīng)(酶切、PCR等)。
12.將吸附柱置于一個(gè)新的離心管中,向吸附柱中間部位懸空加入50-200 μl Buffer GE
或滅菌水,室溫下放置2-5分鐘,10,000 rpm離心1分鐘,收集DNA溶液,-20℃保存DNA。
注意:1)如果下游實(shí)驗(yàn)對(duì)pH值或EDTA敏感,可以用滅菌水洗脫。洗脫液的pH值對(duì)洗脫效率有很大影響,若用水做洗脫液應(yīng)保證其pH值在7.0-8.5(可以用NaOH將水的pH值調(diào)到此范圍),pH值低于7.0時(shí)洗脫效率不高。
2)離心之前室溫孵育5分鐘可以增加產(chǎn)量。
3)用另外的50-200 μl Buffer GE或滅菌水再次洗脫可以增加產(chǎn)量。
4)如果要提高DNA的終濃度,可以將步驟12所得的DNA洗脫液重新加至吸附膜上,10,000 rpm離心1min;若洗脫體積小于200 μl,可以增加DNA的終濃度,但可能會(huì)減少總產(chǎn)量。如果DNA的量小于1 μg,推薦用50 μl Buffer GE或滅菌水洗脫。
5)因?yàn)楸4嬖谒械?/span>DNA會(huì)受到酸性水解作用的影響,如需長(zhǎng)期保存,推薦用Buffer GE洗脫并于-20℃保存。
相關(guān)產(chǎn)品信息
目錄號(hào) 產(chǎn)品名稱
K0688 Es Taq DNA polymerase (with Mg 2+)
K2362 Es Taq DNA polymerase (with Mg 2+, 2.5mM dNTP)
K0690 2×Es Taq Master Mix (含染料)
K0655 2×GoldStar Best Master Mix (含染料)
K0957 UltraSYBR Mixture
K0659 UltraSYBR一步法熒光定量 PCR試劑盒
K0660 UltraSYBR一步法熒光定量 PCR試劑盒 (With ROX)
K0953 GoldStar Taqman Mixture (With ROX)
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