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病毒RNA提取試劑盒操作步驟說(shuō)明書(shū)
點(diǎn)擊次數(shù):1729 更新時(shí)間:2022-06-13

  

病毒RNA提取試劑盒說(shuō)明書(shū)

 

RNApure Virus Kit

 

目錄號(hào):K0586

 

運(yùn)輸條件:室溫(15-25℃)。

 

保存條件:室溫(15-25℃)。

 

組分說(shuō)明

 

                    Size                            50

                    Buffer RLV                     15 ml

                    Buffer RW1                     40 ml

                    Buffer RW2concentrate)        11 ml

                    Proteinase K                  12.5 mg

                    Proteinase K Storage Buffer   1.25 ml

                    RNase-Free Water               10 ml

                    Spin Column RS                  50

                    Collection Tube1.5 ml)         50

                    Collection Tube2 ml)           50

 

              本產(chǎn)品僅供科研使用,請(qǐng)勿用于臨床診斷及其他用途  

 

產(chǎn)品簡(jiǎn)介

 

  本試劑盒采用可以特異性結(jié)合病毒 RNA的吸附柱和*的緩沖液系統(tǒng),適用于從血清、血漿、尿液、腦脊液等無(wú)細(xì)胞體液及細(xì)胞培養(yǎng)上清液中分離病毒RNA。病毒RNA特異性地結(jié)合到硅基質(zhì)膜上,而污染物則流過(guò)該膜。通過(guò)兩次高效洗滌*去除蛋白質(zhì)等雜質(zhì),然后用無(wú)RNase的水或試劑盒提供的RNase-Free  Water洗脫高純度的病毒RNA。由本試劑盒提取的病毒RNA可直接用于RT-PCR、Real-time  RT-PCR和印跡分析等實(shí)驗(yàn)。

 

自備試劑:無(wú)水乙醇,0.9% NaCl。

 

實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備及重要注意事項(xiàng)

 

1.向Proteinase K中加入1.25 ml Proteinase K Storage Buffer使其溶解,-20℃保存。配制好的Proteinase  K勿長(zhǎng)時(shí)間室溫放置,避免反復(fù)凍融,以免影響其活性。

2.預(yù)防RNase污染,應(yīng)注意以下幾方面:

   1)使用無(wú)RNase的塑料制品和槍頭,避免交叉污染。

   2)玻璃器皿應(yīng)在使用前于180℃高溫下干烤4小時(shí),塑料器皿可在0.5 M NaOH中浸10分鐘,用水*沖洗后高壓滅菌。

   3)配制溶液應(yīng)使用無(wú)RNase的水。

   4)操作人員戴一次性口罩和手套,實(shí)驗(yàn)過(guò)程中要勤換手套。

3.血清或血漿避免反復(fù)凍融導(dǎo)致蛋白變性或產(chǎn)生沉淀,減少病毒滴度進(jìn)而影響提取病毒核酸的產(chǎn)量。

4.第一次使用前應(yīng)按照試劑瓶標(biāo)簽的說(shuō)明先在Buffer RW2中加入無(wú)水乙醇。

5Buffer RLV如果產(chǎn)生沉淀,可在56℃加熱使其溶解后室溫放置。

6.所有離心步驟若無(wú)特殊說(shuō)明均在室溫下進(jìn)行,且所有操作步驟動(dòng)作要迅速。

 

操作步驟

 

1.室溫下取200 μl血清或血漿加到1.5 ml離心管(自備)中。

   注意:不足200 μl可以加入0.9 % NaCl(客戶自備)補(bǔ)足。

2.向上步溶液中加入20 μl Proteinase K,混勻。

3.加入200 μl Buffer RLV,渦旋震蕩15秒。

 

   注意:不要直接把Proteinase K加到Buffer RLV中。

456℃孵育15分鐘,短暫離心,將管壁上的溶液收集到管底。

5.加入250 μl無(wú)水乙醇,渦旋震蕩15秒,室溫孵育5分鐘,短暫離心,將管壁上的溶液收集到管底。

6.將步驟5得溶液全部加入到已裝入收集管(Collection  Tube 2  ml)的吸附柱(Spin Column RS)中,若一次不能將全部溶液加入吸附柱中,請(qǐng)分兩次轉(zhuǎn)入,8,000 rpm~6000 ×g)離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

7.向吸附柱中加入500 μl Buffer RW1,8,000 rpm離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

8.向吸附柱中加入500 μl Buffer RW2(使用前檢查是否加入無(wú)水乙醇),8,000  rpm離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

9.向吸附柱中加入500 μl無(wú)水乙醇,8,000 rpm離心1分鐘,倒掉收集管中的廢液,將吸附柱重新放回收集管中。

10.12,000 rpm (~13,400×g)離心3分鐘,倒掉收集管中的廢液。將吸附柱置于室溫?cái)?shù)分鐘,以*晾干。

 

   注意:1)這一步的目的是將吸附柱中殘余乙醇去除,乙醇的殘留會(huì)影響后續(xù)的酶促反應(yīng)(酶切、PCR等)。

 

   2)推薦步驟:將吸附柱放入一個(gè)新的1.5 ml離心管(自備)中,打開(kāi)管蓋,56℃烘箱孵育3分鐘,使吸附柱的膜*干燥。

11.將吸附柱置于一個(gè)新的無(wú)RNase離心管(Collection Tube 1.5  ml)中,向吸附柱的中間部位懸空加入20-50 μl RNase-Free Water,室溫放置5分鐘,12,000 rpm離心1分鐘,收集RNA溶液,-70℃保存RNA,防止降解。

 

   注意:1RNase-Free Water體積不應(yīng)小于20 μl,體積過(guò)小影響回收率。

   2)如果要提高RNA的產(chǎn)量,可用20-50 μl新的RNase-Free Water重復(fù)步驟11

 

   3)如果要提高RNA濃度,可將得到的溶液重新加入到吸附柱中,重復(fù)步驟11。

 

相關(guān)產(chǎn)品信息

 

目錄號(hào)                 產(chǎn)品名稱                                       產(chǎn)品特點(diǎn)

K0580     TRIzonRNA提取試劑                                   適用范圍廣的RNA提取試劑

K0581     超純RNA提取試劑盒

                                                        兼具有適用范圍廣和純度高特點(diǎn)的RNA提取試劑

K0597     超純RNA提取試劑盒(含DnaseI

                                                        靈敏度高,可識(shí)別pg級(jí)別的模板。與RNA親和力強(qiáng),

K0741     SuperRT cDNA第一鏈合成試劑盒

                                                         能夠通讀GC含量高,二級(jí)結(jié)構(gòu)復(fù)雜的RNA模板

K0744     HiFi-MMLV cDNA第一鏈合成試劑盒                 高效獲得cDNA產(chǎn)物

K2381  SuperQuickRT  cDNA第一鏈合成試逆轉(zhuǎn)錄             (針對(duì)于熒光定量PCR

      劑盒(For Real-time PCR                                                    僅需15分鐘,即可完成熒光定量PCR所需的cDNA

K2391     SuperQuickRT MasterMix                                             即用型逆轉(zhuǎn)錄mix,只需加入RNA和水即可反應(yīng)

 (for Real-Time PCR)                                    僅需15分鐘,即可完成熒光定量PCR所需的cDNA

K0688     Es Taq DNA Polymerase

                                       兼具高擴(kuò)增效率和高保真性的PCR產(chǎn)品

K0690     Es Taq MasterMix

K0957     UltraSYBR Mixture                                         熒光定量PCRSYBR Green

K0956    UltraSYBR MixtureWith ROX)           特異性強(qiáng)、Ct值低、定量更準(zhǔn)確

 

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