土壤脲酶 (S-UE) 活性檢測(cè)試劑盒說(shuō)明書(shū)
微量法
注意：正式測(cè)定之前選擇預(yù)期差異大的樣本做預(yù)測(cè)定。
規(guī)格：100T/48S
產(chǎn)品內(nèi)容：
試劑一： 甲苯2mL×1 瓶，4℃保存； (自備)
試劑二：粉劑×1 瓶，臨用前加入9mL 蒸餾水，充分溶解待用，4℃保存；用不完的試劑4℃保 存；
試劑三：液體19mL×1 瓶，4℃保存；
試劑四A 液：液體0.4mL×1 支，4℃保存；
試劑四B 液：液體1.6mL×1 瓶，4℃保存；臨用前將A 液倒入B 液中混合，待用；用不完的試 劑4℃保存一周；
試劑五：液體 2mL×1 瓶，4℃保存；
標(biāo)準(zhǔn)品：液體 1mL×1 支，1mg/mL 氮標(biāo)準(zhǔn)液。
產(chǎn)品說(shuō)明：
S-UE能夠水解尿素，產(chǎn)生氨和碳酸。土壤脲酶活性與土壤的微生物數(shù)量、有機(jī)物質(zhì)含量、
全氮和速效氮含量呈正相關(guān)。土壤脲酶活性反應(yīng)了土壤的氮素狀況。利用靛酚藍(lán)比色法測(cè)定脲酶水 解尿素產(chǎn)生的NH3-N。
需自備的儀器和用品：
可見(jiàn)分光光度計(jì)/酶標(biāo)儀、水浴鍋、可調(diào)式移液器、微量玻璃比色皿/96 孔板、研缽、冰、甲苯 (不允許快遞) 和蒸餾水。
操作步驟：
a. 培養(yǎng)
測(cè)定管 | 對(duì)照管 | |
風(fēng)干土樣(g) | 0.05 | 0.05 |
試劑一 (μL) | 20 | 20 |
振蕩混勻，使土樣全部濕潤(rùn)，室溫放置 15min | ||
試劑二 (μL) | 90 | |
蒸餾水 (μL) | 90 | |
試劑三 (μL) | 190 | 190 |
混勻，放入 37℃水浴培養(yǎng) 24h 后， 10000g 常溫離心 10min ，取上清液。 | ||
b. 將培養(yǎng)結(jié)束的上清液稀釋10 倍 (取0. 1mL 上清液，加入0.9mL 蒸餾水) 。若最終計(jì)算得到的 ΔA仍大于0.5繼續(xù)稀釋。
c. 標(biāo)準(zhǔn)品的準(zhǔn)備：吸取適量的標(biāo)準(zhǔn)溶液，稀釋至10 、8 、6 、4 、2 、1 、0.5 、0μg/mL。
d. 測(cè)氨量 (在微量玻璃比色皿或96 孔板中加入下列試劑)
測(cè)定管 | 對(duì)照管 | 標(biāo)準(zhǔn)管 | |
稀釋后的上清液 (μL) /標(biāo)準(zhǔn)品 | 80 | 80 | 80 |
試劑四 (μL) | 15 | 15 | 15 |
試劑五 (μL) | 15 | 15 | 15 |
充分混勻，室溫放置 20min | |||
蒸餾水 (μL) | 90 | 90 | 90 |
混勻，于 630nm 處，蒸餾水調(diào)零，讀吸光值 A ，計(jì)算ΔA=A 測(cè)定管-A 對(duì)照管。每個(gè)測(cè)定管設(shè)一 個(gè)對(duì)照管。標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)的建立：根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)管的濃度 (y) 和吸光度 ( x,減去濃度為 0 的空白管) ，做標(biāo) 準(zhǔn)曲線(xiàn)。
脲酶活力計(jì)算
根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線(xiàn)，將ΔA帶入公式 (x ) 計(jì)算測(cè)定中樣品的濃度 (μg/mL) y值。 單位的定義：每天每g土樣中產(chǎn)生1μgNH3-N定義為一個(gè)酶活力單位。
脲酶活力 (U/g 土樣) ＝y×10×V反總÷W÷T=60×y
10：稀釋倍數(shù)；T ：反應(yīng)時(shí)間，1d；V反總：反應(yīng)體系總體積，0.3mL；W：樣本質(zhì)量，0.05g。
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