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9L/lacZ大鼠膠質(zhì)肉瘤細(xì)胞傳代/復(fù)蘇技巧
點(diǎn)擊次數(shù):180 更新時(shí)間:2024-07-01

9L/lacZ大鼠膠質(zhì)肉瘤細(xì)胞

,9LlacZ

貨號(hào):YJ-r037(種屬鑒定)

價(jià)格: 1500.0

規(guī)格: 1*10 6

細(xì)胞介紹

9L/lacZ細(xì)胞株1989年從9L細(xì)胞株(大鼠硝基脲誘導(dǎo)的膠質(zhì)瘤細(xì)胞株)發(fā)展而來。 用攜帶E. coli編碼beta-半乳糖苷酶lacZ基因和帶來G418抗性的Tn5新霉素基因BAG復(fù)制缺陷的逆轉(zhuǎn)錄病毒載體感染9L細(xì)胞株。 細(xì)胞在G418存在下培養(yǎng)14天,克隆,并檢測(cè)beta-半乳糖苷酶生成。 9L/lacZ產(chǎn)生高水平的酶,選擇其進(jìn)行后續(xù)研究。 細(xì)胞持續(xù)表達(dá)lacZ報(bào)告基因產(chǎn)物,從E. coli衍生來的beta-半乳糖苷酶,從而可以通過組織切片的組織化學(xué)染色來鑒定單個(gè)腫瘤細(xì)胞。 同一片子上的淋巴細(xì)胞和其它響應(yīng)細(xì)胞也可以通過雙標(biāo)記抗體進(jìn)行鑒定。 染色細(xì)胞和背景的對(duì)比有益于圖像分析。 這是少數(shù)允許量化分析的大腦微觀腫瘤模型中的一種。 這種腫瘤模仿了人類大腦腫瘤的生長(zhǎng)和傳播的重要特性。 beta-半乳糖苷酶的表達(dá)十分穩(wěn)定,但細(xì)胞培養(yǎng)數(shù)月后應(yīng)該重新進(jìn)行克隆。

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1) 準(zhǔn)備:1640 基礎(chǔ)培養(yǎng)基(推薦:YJ-0002),優(yōu)質(zhì)胎牛血清10 %,P/S 1 %

2) 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

9L/lacZ大鼠膠質(zhì)肉瘤細(xì)胞傳代/復(fù)蘇技巧


二.細(xì)胞處理:

1 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長(zhǎng)情況和細(xì)胞密度。

2 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

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