日本黄色三级免费网址,色呦呦在线观看91精品,三级久久黄色播放视频,亚洲国产欧美日韩精品推荐

當(dāng)前位置:
首頁 > 技術(shù)文章 > SW620+GFP人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞+GFP
目錄導(dǎo)航 Directory
服務(wù)熱線
技術(shù)支持Article
SW620+GFP人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞+GFP
點(diǎn)擊次數(shù):171 更新時(shí)間:2024-08-22

SW620+GFP人結(jié)直腸腺癌細(xì)胞+GFP

,SW620/GFP

貨號:YJ-0069a(STR(SW620鑒定)

價(jià)格: 3200.0

規(guī)格: 1*10 6

細(xì)胞介紹

SW620是從一個(gè)51歲男性白人組織中分離得到。 由A.Leibovitz等從一個(gè)淋巴結(jié)建株。細(xì)胞系主要由無絨毛的小園球細(xì)胞和雙極細(xì)胞組成。它僅合成少量癌胚抗原(CEA)且在裸鼠中有高度的致瘤性。

該細(xì)胞通過慢病毒轉(zhuǎn)染的方式攜帶GFP基因。

細(xì)胞特性

1 來源:結(jié)直腸腺癌,來自轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)

2 形態(tài):上皮細(xì)胞樣 貼壁生長

3 含量:>1*10 6 細(xì)胞數(shù)

4 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途:僅供科研使用。

細(xì)胞篩選

該細(xì)胞為穩(wěn)定轉(zhuǎn)染GFP的細(xì)胞,隨細(xì)胞傳代次數(shù)的增加,其GFP熒光強(qiáng)度會逐漸減弱。若實(shí)驗(yàn)要求需要維持熒光強(qiáng)度,可以加入嘌呤霉素進(jìn)行再次篩選。

建議收到細(xì)胞后至少傳3代,凍存留種后再進(jìn)行篩選。

初次進(jìn)行細(xì)胞篩選時(shí),建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基維持培養(yǎng),若無細(xì)胞漂浮或者漂浮較少,即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基繼續(xù)篩選,以此類推,至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中,漂浮細(xì)胞大于60%,則停止篩選,換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),至細(xì)胞密度約80%,可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進(jìn)行篩選。當(dāng)加入5ug/ml嘌呤霉素時(shí)細(xì)胞正常增殖,可停止篩選,用不含藥完全培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

細(xì)胞接收后的處理

1)收到細(xì)胞后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細(xì)胞有污染,請拍照后及時(shí)聯(lián)系我們。

2)請?jiān)?/span>45X顯微鏡下確認(rèn)細(xì)胞狀態(tài),同時(shí)給剛收到的細(xì)胞拍照(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為售后時(shí)收到時(shí)細(xì)胞狀態(tài)的依據(jù)。

3)貼壁細(xì)胞:細(xì)胞在37℃培養(yǎng)箱中放置2-3h,顯微鏡下觀察細(xì)胞的生長和貼壁情況,有些貼壁細(xì)胞在快遞運(yùn)送過程中會因振動(dòng)脫落和脫落后成團(tuán)的情況。若鏡下觀察細(xì)胞的生長密度若在60%以下,可去除培養(yǎng)瓶中灌液培養(yǎng)基(若有未貼壁的細(xì)胞需要離心回收,重懸打入到原培養(yǎng)瓶中),加入新配制的完全培養(yǎng)基6-8mL,放到細(xì)胞培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)。若細(xì)胞生長密度達(dá)70%-80%以上,可以對細(xì)胞進(jìn)行傳代處理。傳代過程中,若因運(yùn)輸振動(dòng)脫落的細(xì)胞需要離心回收。

4備注:運(yùn)輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細(xì)胞,請換用按照說明書細(xì)胞培養(yǎng)條件新配制的完全培養(yǎng)基來培養(yǎng)細(xì)胞。  收到細(xì)胞后第一次傳代建議T25培養(yǎng)瓶12傳代 。                  

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準(zhǔn)備:

1 準(zhǔn)備L15(推薦YJ-0009)培養(yǎng)基;優(yōu)質(zhì)胎牛血清,10%;雙抗,1%。

2 培養(yǎng)條件:氣相:空氣,100%該細(xì)胞培養(yǎng)不能通入CO2,如果沒有條件準(zhǔn)備空氣氣相100%的培養(yǎng)箱的,可以采用不透氣密封蓋的T25培養(yǎng)瓶來培養(yǎng),培養(yǎng)過程中每天將細(xì)胞拿出培養(yǎng)箱換1-2次空氣。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

二.細(xì)胞處理:

1 凍存細(xì)胞的復(fù)蘇:

將含有1mL細(xì)胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細(xì)胞。然后將細(xì)胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細(xì)胞生長情況和細(xì)胞密度。

2 細(xì)胞傳代:如果細(xì)胞密度達(dá)80%-90%,即可進(jìn)行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細(xì)胞傳代可以參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細(xì)胞1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T251-2mL,T752-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細(xì)胞可以適當(dāng)延長消化時(shí)間),然后在顯微鏡下觀察細(xì)胞消化情況,若細(xì)胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。

3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補(bǔ)加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細(xì)胞懸液按12的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細(xì)胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實(shí)際情況按1:2~1:5的比例進(jìn)行。

3)細(xì)胞凍存: 收到細(xì)胞后建議在培養(yǎng)前3代時(shí)凍存一批細(xì)胞種子以備后續(xù)實(shí)驗(yàn)使用。

下面T25瓶為例;

1. 細(xì)胞凍存時(shí)按照細(xì)胞傳代的過程收集消化好的細(xì)胞到離心管中,可使用血球計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù),來決定細(xì)胞的凍存密度。一般細(xì)胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細(xì)胞凍存液重懸細(xì)胞 ,按每1ml凍存液含1×106~1×107個(gè)活細(xì)胞/ml分配到一個(gè)凍存管中將細(xì)胞分配到凍存管中,標(biāo)注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

3. 將要凍存的細(xì)胞置于程序降溫盒中,-80度冰箱中過夜,之后轉(zhuǎn)入液氮容器中儲存。同時(shí)記錄好凍存管在液氮容器中的位置以便后續(xù)查閱和使用。

2011年開始我們致力于在生命科學(xué)領(lǐng)域、生物醫(yī)學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)及論文潤色服務(wù),協(xié)助客戶各類實(shí)驗(yàn)服務(wù)及論文潤色十多年,是您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時(shí)間、試驗(yàn)條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

實(shí)驗(yàn)技術(shù)服務(wù):



滬公網(wǎng)安備 31011802001676號

亚洲国产成人久久精品不卡| 呦男呦女视频精品八区| 国产精品不卡a∨在线观看| 久久精品国产成人午夜福利| 国产一二三区亚洲欧美| 国产一级r片内射老熟女| 欧美成人伦理在线播放| 国内精品国产三级国产av万事达| 亚洲中文无无码第21页| 97精品国产自产在线观看| 免费看中文字幕一级高清| 日本大香焦免费视频| 日本韩国亚洲欧美一区二区三区| 性xx88久久综合| 日韩欧美中文字幕一区二区| 国产农村精品一区二区| 精品国产91乱高清在线观看| 午夜精品久久久久久99| 国产精品23一区二区| 欧美激情国产精品视频| 99久久无色码中文字幕人妻| 一本大道无码人妻精品专区| 亚洲欧美成人激情在线| 免费看中文字幕一级高清| 精品视频亚洲一区二区三区| 国产精品视频二区不卡| 九九免费观看精品视频| 中文字幕日韩欧美推理片免费观看| 国产目拍亚洲精品一区二区| 丰满少妇爽视频一区二区三区| 蜜臀99久久精品久久久| 99久久免费精品国产免费高清| 五月婷婷六月丁香免费视频| 久久久久精品欧美日韩精品| 日本午夜福利在线视频| 一区二区三区欧美激情| 国产精品久久久久久福利69| 亚洲欧洲日韩综合网站| 精品国产片亚洲一区| 日韩激情av一区二区| 国产精品美女作爱视频|