日本黄色三级免费网址,色呦呦在线观看91精品,三级久久黄色播放视频,亚洲国产欧美日韩精品推荐

當前位置:
首頁 > 技術文章 > HUVEC+GFP人臍靜脈內皮細胞永生化+GFP
目錄導航 Directory
服務熱線
技術支持Article
HUVEC+GFP人臍靜脈內皮細胞永生化+GFP
點擊次數(shù):148 更新時間:2024-09-02

HUVEC+GFP人臍靜脈內皮細胞永生化+GFP

Immortalization of human umbilical vein endothelial cells ,HUVEC GFP

貨號:YJ-0022a(免疫熒光鑒定)

價格: 3200.0

規(guī)格: 1*10 6

細胞介紹

該細胞來源于人靜脈內皮,可在半固體培養(yǎng)基中形成克隆,在免疫抑制小鼠中不能形成腫瘤。

該細胞通過慢病毒轉染的方式攜帶GFP基因。

細胞特性

1 來源:人臍帶組織

2 形態(tài):內皮細胞樣 貼壁生長

3 含量:>1x106  細胞數(shù)

4 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

5)  用途:僅供科研使用。

細胞篩選

該細胞為穩(wěn)定轉染GFP的細胞,隨細胞傳代次數(shù)的增加,其GFP熒光強度會逐漸減弱。若實驗要求需要維持熒光強度,可以加入嘌呤霉素進行再次篩選。

建議收到細胞后至少傳3代,凍存留種后再進行篩選。

初次進行細胞篩選時,建議加入終濃度為1ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基維持培養(yǎng),若無細胞漂浮或者漂浮較少,即可更換為含2ug/ml嘌呤霉素的完全培養(yǎng)基繼續(xù)篩選,以此類推,至最高藥物濃度為5ug/ml。若篩選過程中,漂浮細胞大于60%,則停止篩選,換成正常培養(yǎng)基培養(yǎng),至細胞密度約80%,可繼續(xù)加入同濃度嘌呤霉素進行篩選。當加入5ug/ml嘌呤霉素時細胞正常增殖,可停止篩選,用不含藥完全培養(yǎng)基正常培養(yǎng)。

一.培養(yǎng)基及培養(yǎng)凍存條件準備

準備內皮細胞培養(yǎng)體系(推薦:PriMed-YJ-002       

內皮細胞培養(yǎng)基礎培養(yǎng)基                     93%

胎牛血清(FBS                                 5%

內皮細胞培養(yǎng)添加劑                             1%

青霉素/鏈霉素,P/S                               1%

1 培養(yǎng)條件: 氣相:空氣,95%;二氧化碳,5%。 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%

2 凍存液:90%血清,10%DMSO,現(xiàn)用現(xiàn)配。

二.細胞處理:

1 凍存細胞的復蘇:

將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入到含4-6mL完全培養(yǎng)基的離心管中混合均勻。在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,完全培養(yǎng)基重懸細胞。然后將細胞懸液加入含6-8ml完全培養(yǎng)基的培養(yǎng)瓶(或皿)中37℃培養(yǎng)過夜。第二天顯微鏡下觀察細胞生長情況和細胞密度。

2 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,即可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞傳代可以參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子的PBS潤洗細胞1-2次。

2. 加入0.25%(w / v)胰蛋白酶-0.53 mM EDTA于培養(yǎng)瓶中(T251-2mL,T752-3mL),置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘(難消化的細胞可以適當延長消化時間),然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,若細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加入3-4ml10%FBS的培養(yǎng)基來終止消化。 

3.輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心3-5min,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。將細胞懸液按12的比例分到新T25瓶中,添加6-8ml按照說明書要求配置的新的完全培養(yǎng)基以保持細胞的生長活力,后續(xù)傳代根據(jù)實際情況按1:2~1:5的比例進行。

3)細胞凍存: 收到細胞后建議在培養(yǎng)前3代時凍存一批細胞種子以備后續(xù)實驗使用。

下面T25瓶為例;

1. 細胞凍存時按照細胞傳代的過程收集消化好的細胞到離心管中,可使用血球計數(shù)板計數(shù),來決定細胞的凍存密度。一般細胞的推薦凍存密度為1×106~1×107個活細胞/ml.

2. 1000rpm離心3-5min,去掉上清。用配制好的細胞凍存液重懸細胞 ,按每1ml凍存液含1×106~1×107個活細胞/ml分配到一個凍存管中將細胞分配到凍存管中,標注好名稱、代數(shù)、日期等信息。

 

HUVEC+GFP人臍靜脈內皮細胞永生化+GFP.png


2011年開始我們致力于在生命科學領域、生物醫(yī)學實驗技術及論文潤色服務,協(xié)助客戶各類實驗服務及論文潤色十多年,是您值得信賴的科研合作伙伴!

如果您受時間、試驗條件等限制而無法完成您的課題研究,歡迎您與我們聯(lián)系。

 

實驗技術服務:

 


滬公網(wǎng)安備 31011802001676號

一区二区三区精品亚洲视频| 久久久久久999一区二区三区| 欧美大片在线免费看精品一区| 九七成人操碰人人看小视频| 免费在线观看一本视频| 人妻夜夜爽天天爽精品三区| 国产日韩欧美制服另类| 久久久久无码精品国产app| 国产成人av一区二区三区在线观看| 日韩欧美一区中文字幕在线| 西野翔人妻中文字幕电影| 国内自拍2019在线| 中文字幕人妻女同一区| 欧美日韩专区一区二区| 美女久久久高潮喷水91| 亚洲精品一区二区三区中文字幕| 日韩精品视频在线观看一区二区三区| 欧美丰满大爆乳波霸奶水多| 日本欧美一区二区免费不卡| 国产精品国语对白在线观看| 欧美日韩在线免费视频| 成人亚洲视频在线观看| 日韩的一区二区另类免费| 人妻互换免费中文字幕| 草草影院在线免费观看| 欧美日韩一区二区三区大片在线观看| 2017中文字幕在线| 18禁强伦姧人妻又大又久久| 亚洲色无码专区在线观看精品| 亚洲欧美国产国产第二页| 亚洲欧美成在线观看| 丰满的大乳老师三级在线观看| 亚洲国产精品91网| 韩国午夜理伦三级理论电影| 国产精品18禁久久久久久久久| 神马午夜久久久久久| 国产免费黄色片在线观看| 亚洲中文字幕国产综合| 亚洲成人免费久久av| 久久久1区2区3区| 久久国产午夜福利大片|