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人乳腺癌細胞(MDA-MB-231)

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詳細介紹

人乳腺癌細胞(MDA-MB-231

細胞介紹

MDA-MB-231來自患有轉移乳腺腺癌的51歲白種人女病人的胸水。 在裸鼠和ALS處理的BALB/c小鼠中,它能形成低分化腺癌(III級)。細胞表達WNT7B致癌基因。 此細胞株可能作為轉染宿主。

細胞特性

1) 來源:女性,乳腺;源自轉移部位:胸腔積液

2) 形態(tài)貼壁生長,上皮樣

3) 含量:>1x106

4) 污染:支原體、細菌、酵母和真菌檢測為陰性

5) 規(guī)格:T25瓶或者1mL凍存管包裝

 

運輸和保存:可選擇干冰運輸及發(fā)送復蘇存活細胞方式:1干冰運輸,收到后立即轉入液氮或者-80度冰箱凍存或直接復蘇;2存活細胞,收到后應繼續(xù)生長傳代達到細胞生長狀態(tài)良好時,再進行凍存。具體操作見細胞培養(yǎng)步驟。

收到細胞后請拍照,3天內如果發(fā)現(xiàn)污染,請及時拍照與我們聯(lián)系。

 

細胞用途:僅供科研使用。

 

細胞接收后的處理:

1) 收到細胞后,請檢查發(fā)貨培養(yǎng)瓶的狀況,若發(fā)現(xiàn)培養(yǎng)瓶破損、有液溢出及細胞有污染,請拍照后及時聯(lián)系我們。

2) 在顯微鏡下確認細胞生長狀態(tài)時,hao在低倍鏡(4或5X物鏡)下進行,能準確判斷細胞的傳代密度。看細胞的形態(tài)請在10X和20×物鏡下,同時給剛收到的細胞拍照,(10×,20×)各2-3張以及培養(yǎng)瓶外觀照片一張留存,作為細胞需要售后時提供收到細胞時細胞狀態(tài)的依據(jù)。

3) 觀察好細胞狀態(tài)后,75%酒精消毒瓶壁將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h。

4) 貼壁細胞:在運輸過程中貼壁細胞會有脫落的現(xiàn)象,如發(fā)現(xiàn)貼壁細胞有脫落或者脫落后抱團生長,可將T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和未貼壁細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到加有按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基的原培養(yǎng)瓶中(或新的培養(yǎng)瓶中)。

5) 懸浮細胞:T25瓶置于37℃培養(yǎng)箱放置約2-3h,然后抽出瓶中的培養(yǎng)基和細胞1000rpm離心5分鐘,棄去上清重懸后接種到新的培養(yǎng)瓶中(加入按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基)。

6)備注:運輸用的培養(yǎng)基(灌液培養(yǎng)基)不能再用來培養(yǎng)細胞,請換用按照說明書細胞培養(yǎng)條件新配制的*培養(yǎng)基來培養(yǎng)細胞。  收到細胞后第yi次傳代建議1:2傳代 。

                       

細胞培養(yǎng)步驟

一.培養(yǎng)基培養(yǎng)凍存條件準備:

1)  L15(推薦iCell-0009)基礎培養(yǎng)基;優(yōu)質胎牛血清,10%;1%雙抗。

關于細胞培養(yǎng)的注意事項

(1)該培養(yǎng)基不需要通入CO2

(2)細胞形態(tài)大部分為紡錘狀,也有部分細胞呈現(xiàn)圓形,培養(yǎng)過程中會有少量懸浮細胞。

(3)如果細胞生長太過緩慢,可以適當提高血清濃度到15%-20%。

 

2) 培養(yǎng)條件氣相:空氣,100%; 溫度:37攝氏度,培養(yǎng)箱濕度為70%-80%。

3) 凍存液90%血清,10%DMSO現(xiàn)用現(xiàn)。

 

二. 細胞處理

1) 復蘇細胞:將含有1mL細胞懸液的凍存管在37℃水浴中迅速搖晃解凍,加入4mL培養(yǎng)基混合均勻。在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)基后吹勻。然后將所有細胞懸液加入培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)過夜(或將細胞懸液加入10cm皿中,加入8ml培養(yǎng)基,培養(yǎng)過夜)。第二天換液并檢查細胞密度。

2) 細胞傳代:如果細胞密度達80%-90%,可進行傳代培養(yǎng)。

對于貼壁細胞,傳代可參考以下方法:

1. 棄去培養(yǎng)上清,用不含鈣、鎂離子PBS潤洗細胞1-2。

2. 加2ml消化液0.25%Trypsin-0.53mM EDTA)培養(yǎng)瓶中,置于37℃培養(yǎng)箱中消化1-2分鐘,然后在顯微鏡下觀察細胞消化情況,細胞大部分變圓并脫落,迅速拿回操作臺,輕敲幾下培養(yǎng)瓶后加少量培養(yǎng)基終止消化。

3. 按6-8ml/瓶補加培養(yǎng)基,輕輕打勻后吸出,在1000RPM條件下離心4分鐘,棄去上清液,補加1-2mL培養(yǎng)液后吹勻。

4. 將細胞懸液按1:2到1:5的比例分到新的含8ml培養(yǎng)基的新皿中或者瓶中。

yi次傳代推薦傳代比例為1:2,以后傳代比例可根據(jù)客戶需要自己決定。

3)細胞凍存:細胞生長狀態(tài)良好時,進行細胞凍存。

下面T25瓶為類;

      1,細胞凍存時,棄去培養(yǎng)基后,PBS清洗一遍后加入1ml胰酶,細胞變圓脫落后,加入1ml血清的培養(yǎng)基終止消化,可使用血球計數(shù)板計數(shù)。

      2,4min 1000rpm 離心去掉上清。加1ml血清重懸細胞,根據(jù)細胞數(shù)量加入血清和DMSO,輕輕混勻,DMSO終濃度為10%,細胞密度不低于1x106/ml,每支凍存管凍存1ml細胞懸液,注意凍存管做好標識。

      3,將凍存管置于程序降溫盒中,放入-80度冰箱,至少2個小時以后轉入液氮灌儲存。記錄凍存管位置以便下次拿取。

 

 

注意事項:

1. 收到細胞后,若發(fā)現(xiàn)干冰已揮發(fā)干凈、凍存管瓶蓋脫落、破損及細胞有污染,請立即與我們聯(lián)系。

2. 所有動物細胞均視為潛在的生物危害性,必須在二級生物安全內操作,并請注意防護,所有廢液及接觸過此細胞的器皿需要滅菌后方能丟棄。

 

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